[发明专利]一种基于表面增强拉曼光谱检测β-半乳糖苷酶的方法

权利要求书

1.一种基于表面增强拉曼光谱检测血清中β-半乳糖苷酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)纳米金星(Au NSs)制备：利用种子介导法得Au NSs溶液；

(2)Au NSs阵列制备；

(3)Au NSs-PMBA阵列制备；

(4)Au NSs/PATP-PMBA制备；

(5)基底的组装与功能化：将Au NSs-PMBA阵列与β-lactose修饰；再将Au NSs/PATP-PMBA组装到经β-lactose修饰后的Au NSs-PMBA阵列上，形成一个三明治结构用于与β-半乳糖苷酶孵育，孵育后用超纯水清洗；借助激光拉曼光谱仪收集数据图谱得到工作曲线，以标签上PATP受激光照射产生的新信号1437cm^-1为标志峰，实现对血清β-半乳糖苷酶含量的超灵敏检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中β-半乳糖苷酶的方法，其特征在于，所述纳米金星(Au NSs)制备方法如下：首先，96mL超纯水加热至沸腾并持续搅拌，加入4mL 1％HAuCl₄水溶液，溶液变成黄色，1min后迅速加入15mL 1％柠檬酸钠水溶液，几秒钟后溶液变成黑色，3-4min后溶液逐渐变成酒红色，搅拌6-7分钟后停止加热，持续搅拌至室温获得金种子；随后，在19.4mL水中加入200μL 1％HAuCl₄水溶液，不断搅拌，加入200μL金种子，2-3min后分别加入200μL AgNO₃(3mM)，100μL抗坏血酸溶液(100mM)逐滴加入，待溶液变成蓝色，连续搅拌10min，以4000rpm离心15min，终止反应并重悬得到纳米金星(Au NSs)，在4℃下保存。

3.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中β-半乳糖苷酶的方法，其特征在于，所述Au NSs阵列的制备方法如下：首先，将玻璃片切成约0.5cm×0.5cm的方形片，在超声波清洗机中依次用超纯水、无水乙醇清洗15分钟，在空气中干燥后，将这些玻璃片浸入食人鱼溶液(H₂O₂/H₂SO₄，3:7，v/v)中，在90℃下浸泡2小时，依次用大量甲醇和超纯水清洗上述玻璃片，再将其浸入有机硅烷(APTMS/CH₃OH，1:4，v/v)的甲醇溶液中24h，用甲醇冲洗玻璃片得到氨基化玻璃板；随后，将步骤(1)制得的纳米金星(Au NSs)浓缩、重悬为不透明溶液，并浸泡于氨基化后的玻璃板24h，并以超纯水冲洗并保存。

4.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中β-半乳糖苷酶的方法，其特征在于，所述Au NSs-PMBA阵列的制备方法如下：将步骤(2)制得的Au NSs阵列首先被浸没在1mM的PMBA乙醇溶液中24小时，并用乙醇清洗去除未结合的PMBA分子。

5.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中β-半乳糖苷酶的方法，其特征在于，所述Au NSs-PMBA阵列与β-lactose修饰制备方法如下：将步骤(3)制得的Au NSs-PMBA阵列与β-lactose孵育，达到吸附平衡，并用超纯水冲洗后烘干备用。

6.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼技术检测血清中β-半乳糖苷酶的方法，其特征在于，所述Au NSs/PATP-PMBA制备方法如下：步骤(1)制得的纳米金星(Au NSs)浓缩、重悬后，先在强磁搅拌下，将100μL的PATP(1mM)和PMBA(0.5mM)的混合物快速加入到100mL的Au NSs胶体溶液中，持续1小时，再在3500rpm下离心10分钟，用1％柠檬酸钠水溶液洗涤两次，最后，重新分散在超纯水中制得Au NSs/PATP-PMBA(2:1)胶体。