[发明专利]胃癌早期筛查的DNA甲基化标志物组合及试剂盒

权利要求书

1.检测人外周血样本单个核细胞中KLRK1基因的chr12_10541790位点、TRDJ3基因的chr14_22927264位点和chr14_22926867位点、TRDC基因的chr14_22931150位点甲基化状态的物质在制备胃癌早期筛查试剂或试剂盒中的应用。

2.一种胃癌早期筛查试剂盒，其特征在于，包括KLRK1基因chr12_10541790位点、TRDJ3基因chr14_22927264位点和chr14_22926867位点、TRDC基因chr14_22931150位点的甲基化检测引物对及探针，其中，

所述KLRK1基因chr12_10541790位点的甲基化检测引物对包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；

所述KLRK1基因chr12_10541790位点的甲基化探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述TRDJ3基因chr14_22927264位点的甲基化检测引物对包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示；

所述TRDJ3基因chr14_22927264位点的甲基化探针的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述TRDJ3基因chr14_22926867位点的甲基化检测引物对包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；

所述TRDJ3基因chr14_22926867位点的甲基化探针的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；

所述TRDC基因chr14_22931150位点的甲基化检测引物对包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示；

所述TRDC基因chr14_22931150位点的甲基化探针的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示。

3.根据权利要求2所述胃癌早期筛查试剂盒，其特征在于，还包括内参基因ACTB的甲基化检测引物对和探针，正向引物和反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.13和SEQ IDNo.14所示；探针的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示。

4.根据权利要求3所述胃癌早期筛查试剂盒，其特征在于，KLRK1基因chr12_10541790位点、TRDJ3基因chr14_22927264位点和chr14_22926867位点、TRDC基因chr14_22931150位点甲基化探针的5'端均标记有荧光基团FAM，3'端均标记有淬灭基团BHQ1；内参基因ACTB基因的5'端标记有荧光基团VIC，3'端标记有淬灭基团BHQ1。

5.根据权利要求4所述胃癌早期筛查试剂盒，其特征在于，还包括阳性质控品和阴性质控品，所述阳性质控品为亚硫酸氢盐修饰的全甲基化人类基因组DNA，所述阴性质控品为亚硫酸氢盐修饰的非甲基化人类基因组DNA。

6.根据权利要求4所述胃癌早期筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括一个诊断模型，公式如下：

ΔCt=VIC荧光通道的Ct值-FAM荧光通道的Ct值；

VIC荧光通道的Ct值≤35，ΔCt＞2.0157，则结果为阳性；

VIC荧光通道的Ct值≤35，ΔCt≤2.0157，则结果为阴性；

VIC荧光通道的Ct值35或无扩增，ΔCt为任何结果，结果皆为无效，需要重新提取转化样本后检测；

若判读结果为阴性，代表患胃癌的风险低；若判读结果为阳性，代表患胃癌的风险高。