[发明专利]一种人原代细胞分离试剂盒及分离方法

说明书

本发明涉及一种人原代细胞分离试剂盒及分离方法，试剂盒包括：组织处理液、细胞消化液和细胞获取液；所述组织处理液的组分包括平衡盐溶液、青霉素、链霉素和两性霉素；所述细胞消化液由消化酶、血清和基础培养基组成；所述细胞获取液的组分为人组织细胞培养基。本发明提供的人原代细胞分离试剂盒，可快速高效的从人组织中获得原代细胞。

技术领域

本发明涉及人原代细胞分离技术领域，特别是涉及一种人原代细胞分离试剂盒及分离方法。

背景技术

人原代细胞是指从人体取细胞、组织或器官直接培养的细胞，一般把培养的第1代到第10代以内的细胞统称为原代细胞。原代细胞因保持有原有细胞的基本性质，可广泛应用于药物筛选、药物代谢、毒理研究和癌症药物研究。

常用的人原代细胞分离方法有组织贴块法和消化分散细胞法。由于组织贴块法细胞爬出较慢，细胞老化和细胞污染(多种细胞同时生长)情况严重，人们大多选择消化分散细胞法。单一的消化酶消化原代细胞会出现细胞消化过度或者细胞消化不完全，导致分离出来的细胞不贴壁或者数量稀少，最后细胞凋亡。多种消化酶联合使用可以最大化的消化细胞，但又能减少对细胞损伤，保证细胞活性。

尽管目前人原代细胞分离技术已有很大发展，但在实际操作中，由于各技术人员对人原代细胞分离技术了解不同，无法做到最佳分离效果。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种人原代细胞分离试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

一种人原代细胞分离试剂盒，包括：组织处理液、细胞消化液和细胞获取液；

所述组织处理液的组分包括平衡盐溶液、青霉素、链霉素和两性霉素；所述细胞消化液由消化酶、血清和基础培养基组成；所述细胞获取液的组分为人组织细胞培养基。

优选地，所述组织处理液的具体成分浓度为：500-50U/ml的所述青霉素、500-50mg/ml的所述链霉素和1-4ug/ml的所述两性霉素。

优选地，所述细胞消化液中的消化酶的浓度为0.1-0.25％，血清浓度为10-20％，基础培养基为DMEM/F12。

优选地，所述消化酶包括胰酶和Ⅰ型胶原酶。

优选地，所述人组织细胞培养基由基础培养基和血清组成。

一种人原代细胞分离方法，包括：

将人组织置于培养皿中，加入组织处理液对所述人组织进行漂洗和浸泡，并在漂洗和浸泡之后弃去所述组织处理液；

将经漂洗和浸泡后的人组织中加入4-10ml细胞消化液，并将所述人组织进行剪裁，得到组织碎片，并将所述细胞消化液和所述组织碎片置于37℃、5％CO₂的孵箱中孵育1-4h；

利用移液管对所述细胞消化液和所述组织碎片进行吹打，并利用目网筛对吹打后的组织液体进行过滤，并进行离心，以去除上清液；

将去除上清液的组织液体中加入人细胞，并获取重悬细胞，对所述重悬细胞进行离心，以去除上清液得到细胞沉淀，将所述细胞沉淀加入至培养基进行重悬，并进行接种培养，以获得分离后的人原代细胞。

根据本发明提供的具体实施例，本发明公开了以下技术效果：

本发明提供了一种人原代细胞分离试剂盒及分离方法，试剂盒包括：组织处理液、细胞消化液和细胞获取液；所述组织处理液的组分包括平衡盐溶液、青霉素、链霉素和两性霉素；所述细胞消化液由消化酶、血清和基础培养基组成；所述细胞获取液的组分为人组织细胞培养基。本发明提供的人原代细胞分离试剂盒，可快速高效的从人组织中获得原代细胞。

具体实施方式