[发明专利]一种采用膜分离纯化虫草多糖的方法

说明书

本发明公开了一种采用膜分离纯化虫草多糖的方法，包括如下步骤：将粗虫草多糖液减压浓缩，静置后分离得到浓缩沉淀a和浓缩液a；将浓缩液a再次减压浓缩，静置后分离得到浓缩沉淀b和浓缩液b；将浓缩沉淀a与浓缩沉淀b混合得到浓缩沉淀c；将浓缩沉淀c加入氢氧化钠溶液中搅拌均匀，过滤，除去沉淀，将产物与浓缩液a、浓缩液b合并；然后向其中加入蛋白酶K溶液，50‑60℃酶解1‑2h，加入乙醇溶液中沉淀，离心除去上清液，干燥得到粗提虫草多糖；向粗提虫草多糖中加水，采用超滤膜超滤，超滤过程中密封隔氧得到透过液和截留液，将截留液真空冷冻干燥得到分离虫草多糖；将透过液真空冷冻干燥得到分离虫草多糖。

技术领域

本发明涉及虫草多糖纯化技术领域，尤其涉及一种采用膜分离纯化虫草多糖的方法。

背景技术

虫草多糖为大分子葡聚物，存在于菌粉的子实体、子座、菌丝体等多个部位以及发酵培养液中。常用的提取方法有：水提取法、微波萃取技术、超声波辅助提取法、生物酶解法辅助提取技术、半仿生提取法和超临界流体萃取技术等。利用传统的水提醇沉法或是超声波辅助提取法所得虫草多糖都是粗多糖，其中会含有鞣质、色素、蛋白质、脂类等杂质，因此有必要对所得粗多糖进行分离纯化。

目前，对虫草多糖的生物活性研究有很多，由于多糖成分的复杂性以及分离纯化的局限性，直接限制了对药效作用机制的进一步研究，也阻碍了中药多糖拓展国外市场的步伐，因此需要加强对虫草多糖的作用机制及高纯产物的获取研究。常用的纯化技术有膜分离法、柱层析法、盐析法、离子交换法、分步沉淀法、季铵盐沉淀法、金属络合法和凝胶色谱法等。

膜分离法是利用具有选择性筛分作用的分离膜，以膜两侧的压力差、浓度差、电位差等为推动力，凭借各组分在膜中传质的选择性差异达到分离目的的分离过程。膜分离技术在过程中无相变、无二次污染且操作方便、结构紧凑、维修费用低、易自动化，是现代分离技术中效率较高的分离手段。

超滤法是一种新型的膜分离纯化技术，主要是通过已知分子量截留值的超滤膜对多糖溶液直接进行分离、纯化、浓缩富集。在实际工业生产中，不管是以传统方法还是现代先进技术提取多糖的溶剂一般为水，所得粗多糖中含有蛋白质、色素等多种杂质，其分离纯化是及其困难的。随着超滤法的快速发展和应用，包括多糖在内的中药成分的分离纯化也得到了极大地提高。

钟蕾等(钟蕾,赵汉臣,闫荟,等.膜分离技术与传统工艺对六味地黄活性多糖富集效果的比较[J].药学实践杂志,2007,25(6):386-387.)通过比较传统工艺与膜分离技分别对多糖的浓缩富集效果发现，超、纳滤膜分离技术所的多糖含量是传统工艺所得胶囊中的6.5倍，大大的提高了工作效率和经济效益，表明膜分离技术在活性多糖的浓缩富集方面有很大的优势和发展前景。张桂(张桂.膜分离技术提取枸杞多糖的工艺[J].食品工程,2008(4):4.)采用具有较大通量的微滤膜对枸杞多糖溶液进行预处理后，再结合超滤技术对枸杞多糖进行分离纯化，最后通过比较分析得出分子切割量为10kD的超滤膜对多糖的纯化效果最好，透过率高达90％以上。

本申请在现有提取分离技术研究基础上，结合膜分离技术与酶工程技术对虫草多糖提取分离纯化进行改良，以得到虫草多糖组分，初步确定多糖组分的免疫活性，为今后开发免疫方面的虫草多糖研究提供一定的理论支持。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种采用膜分离纯化虫草多糖的方法。

一种采用膜分离纯化虫草多糖的方法，包括如下步骤：

(1)将粗虫草多糖液减压浓缩，静置后分离得到浓缩沉淀a和浓缩液a；将浓缩液a再次减压浓缩，静置后分离得到浓缩沉淀b和浓缩液b；将浓缩沉淀a与浓缩沉淀b混合得到浓缩沉淀c；

(2)将浓缩沉淀c加入氢氧化钠溶液中搅拌均匀，过滤，除去沉淀，将产物与浓缩液a、浓缩液b合并；然后向其中加入蛋白酶K溶液，50-60℃酶解1-2h，加入乙醇溶液中沉淀，离心除去上清液，干燥得到粗提虫草多糖；