[发明专利]一种快速测定食品和乳品中维生素B12的检测方法

说明书

本发明属于食品快速检测技术领域，具体涉及一种快速测定食品和乳品中维生素B12的检测方法，包括以下步骤：S1.制备菌株储备液；S2.制备测定用平板；S3.制备标准溶液；S4.制备样液；S5.制备标准曲线及维生素B12含量的测定。本发明采用杯碟法建立维生素B12的快速测定方法，克服传统微生物法的检测缺陷，操作简单，效率高，成本低，重现性好，结果稳定，适用于大批量样品的检测需求。

技术领域

本发明属于食品快速检测技术领域，具体涉及一种快速测定食品和乳品中维生素B12的检测方法。

背景技术

目前，国内外关于维生素B12的检测方法主要有：微生物法、高效液相色谱法、超高效液相色谱 -串联质谱法、酶联免疫吸附法等。

相对于其他方法，微生物发具有较高的灵敏度，且可检测具有生物活性的维生素B12。我国食品安全国家标准亦将微生物法作为维生素B12的首选方法和仲裁方法。但现有的微生物法存在以下几点问题：

1、在菌种使用方面，将莱士曼氏乳酸杆菌(Lactobacillus leichmannii ATCC7830)转接至琼脂培养基活化保存为储备菌株后，需每15天传种一次。试验前提前将储备菌株转接到肉汤培养基培养24h重新活化，再经离心洗脱数次、调整菌浓度制成接种液。试验过程容易造成菌株污染，且工作量大，时效性差。

该方法虽然将菌浓度和培养时间控制在一定范围内，但是由于不同代数的菌株活力不同，使用相同的菌浓度和培养时间不适用于不同代数菌株的生长。菌的生长规律也存在一定的偏差，无法有效的控制试验结果的稳定性。

2、样液的制备方面，样品需要经过多步灭菌、调pH值、稀释，分别加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL试样提取液至试管中,补水至5.0mL,加入5.0mL维生素B12测定用培养液。

制备过程用到大量的玻璃器皿，对器皿清洗要求高。试验操作繁琐、耗时长，无法满足大批量样品的检测需求。并且试验过程容易出现人为误差，导致试验结果不稳定。

3、单个样品的培养需要用到至少60mL培养基，分装至12根玻璃试管。成本高，且需要足够的空间培养。

4、测定方面，现有方法需将培养液混匀后，转移至比色皿，使用分光光度计进行读数。每个样品需测量12个数据，且由于培养液中菌处于活动状态，因此容易造成数据不稳定，操作繁琐且测定时间长。

5、试验成本方面，以100个样计，现有方法以两名实验人员计算，耗时35天以上、耗材约1.5万元。

综上所述，现有微生物法检测维生素B12存在操作繁琐、测定时间长、对人员要求较高，不易掌握，易污染、重现性差，无法满足大批量样品快速检测的需求等问题。

虽然中国专利CN201010277447.5公开了一种测定维生素H的生物学检测方法，通过维生素H浓度的对数值与生长圈直径的线性关系，建立一种快速简便检测维生素H含量的方法。但是，仍然存在以下问题：

1、在进行试验前，需配置菌悬液，且菌悬液配置时间较长，一般为3天，检测效率低；

2、采用的储备菌液，须反复活化传代，影响实验结果；

3、培养皿中培养基含量为25mL，培养基厚度大，不利于菌的生长扩散，且生长圈不易观察测量；同时采用的是覆盖法：培养基厚度大，透光性不强，模糊不易测量；

4、培养时间为2天，时间较长。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种快速测定食品和乳品中维生素B12的检测方法。

本发明的技术方案为：

一种快速测定食品和乳品中维生素B12的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：