[发明专利]一种“金蚕花”抗炎活性多糖的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种“金蚕花”抗炎活性多糖的制备方法及应用。“金蚕花”粉经丙酮‑石油醚回流脱脂和乙醇回流除去苷类后，用双蒸馏水于85℃下提取出粗多糖；粗多糖液经Sevag法去除蛋白质后，用乙醇沉淀，再用包含多次柱层析的处理获得纯化物，从而得到“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP。本发明制备的产物，纯度均一，分子量为2.26×10⁴Da，对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO、IL‑6、TNF‑α均有抑制作用，表现出明显的抗炎作用，但对正常小鼠巨噬细胞RAW264.7的生长无不良影响，可用于抗炎产品开发。

技术领域

本发明涉及了一种中药材中提取多糖的制备方法及应用，尤其是涉及一种“金蚕花”抗炎活性多糖的制备方法及应用。

背景技术

多糖(polysaccharide)是由单糖聚合而成并且聚合度大于10的极性复杂大分子，分子量一般为数万甚至数百万。多糖是继蛋白质、核酸之后，又一携带大量生物信息的生物大分子，来源于真菌、藻类地衣、植物、细菌、动物等。药理和临床研究结果表明，天然多糖具有抗癌、抗炎、降血糖、增强体质等作用，而且毒副作用小，受到人们越来越广泛的重视。

蝉花(Cordyceps cicadae)为麦角菌科真菌大蝉草的无性型蝉拟青霉寄生蝉类若虫体后所产生的子座与若虫尸体的菌虫复合体，又名蝉草、蝉茸、胡蝉、金蝉花等，是我国一味传统的名贵中药材。由于自然界中野生蝉花资源日趋枯竭,人工培养蝉花越来越显得必要。

发明内容

为了解决背景技术中的问题，本发明提供了一种“金蚕花”抗炎活性多糖的制备方法及应用，采用回流提取、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析柱分离以及SephacrylS-300层析柱和Sephacryl S-400层析柱纯化的方法，制备得到了“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP，“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP是发明人从“金蚕花”中分离提取的一种新型抗炎活性多糖，其分子量为2.26×104Da，将其命名为JNIP。

本发明采用的技术方案如下：

一、一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法：

1)将“金蚕花”处理获得“金蚕花”粉；

2)“金蚕花”粉依次进行脱脂和除去苷类处理；

3)脱脂和除去苷类处理后的“金蚕花”粉，用超声波辅助双蒸馏水回流获得粗多糖液；

4)粗多糖液除蛋白后，用乙醇沉淀获得多糖；

5)对多糖进行连续多次层析柱洗脱处理，进而获得纯化物，从而得到“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP。

具体实施后对纯化物用Waters 1525型高效液相色谱系统检测，为均一的多糖组分，取名JNIP。

所述的“金蚕花”是本发明申请将蝉拟青霉ST168感染药食同源的蚕蛹，经人工培养而成的中药材蝉花代用品。但“金蚕花”的药用机理特别是抗炎机理还不清楚，这阻害了“金蚕花”作为蝉花代用品的开发应用。制备“金蚕花”抗炎活性多糖并应用于抗炎药物开发，对于推进“金蚕花”作为蝉花代用品的开发应用以及提升蚕桑产业，均具有积极的社会效益和经济效益。

所述步骤1)具体为：将“金蚕花”于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，过80～100目筛，得到“金蚕花”粉。

所述步骤2)具体为：取“金蚕花”粉，按W：V为1：3加入丙酮-石油醚混合液，丙酮-石油醚混合液中丙酮与石油醚体积比为1:1，在60℃下回流脱脂1h且重复2次，再抽滤，残渣用5倍体积质量浓度为70％乙醇在85℃下回流1h除去苷类且重复3次，再抽滤，残渣于40℃烘干。