[发明专利]一种“金蚕花”抗炎活性多糖的制备方法及应用

权利要求书

1.一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法，其特征在于：

1)将“金蚕花”处理获得“金蚕花”粉；

2)“金蚕花”粉依次进行脱脂和除去苷类处理；

3)脱脂和除去苷类处理后的“金蚕花”粉，用超声波辅助双蒸馏水回流获得粗多糖液；

4)粗多糖液除蛋白后，用乙醇沉淀获得多糖；

5)对多糖进行连续多次层析柱洗脱处理，进而获得纯化物，从而得到“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP。

2.根据权利要求1所述的一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法，其特征在于：所述步骤1)具体为：将“金蚕花”于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，过80～100目筛，得到“金蚕花”粉。

3.根据权利要求1所述的一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法，其特征在于：所述步骤2)具体为：取“金蚕花”粉，按W：V为1：3加入丙酮-石油醚混合液，丙酮-石油醚混合液中丙酮与石油醚体积比为1:1，在60℃下回流脱脂1h且重复2次，再抽滤，残渣用5倍体积质量浓度为70％乙醇在85℃下回流1h除去苷类且重复3次，再抽滤，残渣于40℃烘干。

4.根据权利要求1所述的一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法，其特征在于：所述步骤3)具体为：烘干残渣按W：V为1：25加入双蒸馏水，超声波处理30～35min后，于85℃下提取1.5～2.0h，用抽滤机进行抽滤处理，取滤液用高速离心机于9000rpm下离心5min，收集上清液用旋转蒸发仪浓缩后，-50℃下真空干燥，得到粗多糖，将粗多糖按W：V为1：10加入双蒸馏水溶解获得粗多糖液。

5.根据权利要求1所述的一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法，其特征在于：所述步骤4)具体为：针对粗多糖液，用体积比为4:1的氯仿与正丁醇除蛋白至碘颜色反应和茚三酮反应均检测不到蛋白质，接着于50℃下旋蒸以除去氯仿与正丁醇，加入质量浓度为100％的乙醇，使乙醇质量浓度达到70％，充分搅拌后置冰箱过夜，沉淀得到多糖。

6.根据权利要求1所述的一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法，其特征在于：所述步骤5)具体为：

5.1)多糖用去离子水溶解，再离心取上清液，上清液过滤膜后上DEAE-Sepharose FastFlow离子交换层析柱，用去离子水洗脱，收集洗脱峰的洗脱液，浓缩并冷冻干燥后得到中性多糖组分；

5.2)中性多糖组分用去离子水溶解，过滤膜后上Sephacryl S-300层析柱，用去离子水洗脱，收集洗脱峰的洗脱液，浓缩后得到多糖浓缩液；

5.3)多糖浓缩液过滤膜后上Sephacryl S-400层析柱，用去离子水洗脱，收集洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥得到干燥纯化物。

7.根据权利要求1或6所述的一种“金蚕花”抗炎活性多糖JNIP的制备方法，其特征在于：所述步骤5)具体为：

5.1)多糖用去离子水溶解配制成20mg/mL溶液，9000rpm离心10min，取上清液，过0.45μm滤膜，上DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析柱，用去离子水以3.2～3.4mL/min流速洗脱，自动收集器收集，苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱液，用旋转蒸发仪浓缩后，-50℃下真空干燥，得到中性多糖组分；

5.2)中性多糖组分用去离子水溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液，过0.45μm滤膜，上Sephacryl S-300层析柱，用去离子水以0.8～1.0mL/min流速洗脱，自动收集器收集，苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱液，用旋转蒸发仪浓缩，得到浓度为10mg/mL的多糖浓缩液；

5.3)多糖浓缩液过0.45μm滤膜，上Sephacryl S-400层析柱，用去离子水以0.8～1.0mL/min流速洗脱，自动收集器收集，苯酚-硫酸法检测，收集有显色反应的洗脱液，用旋转蒸发仪浓缩后，-50℃下真空干燥得到干燥纯化物。