[发明专利]构建BRCA1基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用

说明书

本发明公开了构建BRCA1基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示BRCA1‑gRNA3、SEQ ID NO：17所示BRCA1‑gRNA4和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组细胞的方法：将BRCA1‑gRNA3、BRCA1‑gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。所述重组细胞为BRCA1基因发生突变的重组细胞。试剂盒的用途为：制备重组细胞；制备乳腺癌模型猪；制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。本发明对于乳腺癌药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体属于基因编辑技术领域，更具体涉及构建BRCA1基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。

背景技术

根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球最新癌症负担数据显示，2020年内新增癌症病例60％来自于最常见的10种肿瘤，其中女性乳腺癌占11.7％，在数量上首次超越了肺癌(11.4％)，成为全球诊断人数最多的癌症。女性乳腺癌第一次成为最常被诊断出的癌症，是威胁女性健康的第一杀手，也成为了当今最紧迫的健康问题之一。1990年，研究者发现了一种直接与遗传性乳腺癌有关的基因，命名为乳腺癌1号易感基因(Breast cancer susceptbility gene 1，简称BRCA1)。BRCA1基因在调节人体细胞的复制、遗传物质DNA损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用。拥有这个基因突变的家族具有比正常人更高的乳腺癌发生率。

研究乳腺癌的发生发展机制及研发相应的药物均需要在动物模型的基础上进行，目前常用的动物模型为小鼠模型，然而小鼠不论从体型、器官大小、生理、病理等方面都与人相差巨大，不能真实地模拟人类正常的生理、病理状态。猪作为大动物，其体型大小和生理功能与人类近似，易于大规模繁殖饲养，而且在伦理道德及动物保护等方面要求较低，是理想的人类疾病模型动物。

基因编辑是近年来不断取得重大发展的一种生物技术，其包括从基于同源重组的基因编辑到基于核酸酶的ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等编辑技术，其中CRISPR/Cas9技术是当前最先进的基因编辑技术。目前，基因编辑技术被越来越多地应用到动物模型的制作上。

发明内容

本发明的目的是提供构建BRCA1基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。

本发明提供了一种试剂盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和PRONCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和特异质粒。

以上任一所述试剂盒还包括猪细胞。

本发明提供了BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和特异质粒在制备试剂盒中的应用。

以上任一所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备乳腺癌模型猪；(c)制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。

本发明提供了一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：将BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。

所述共转染具体采用电击转染的方式。

电击转染的参数设置具体可为：1450V、10ms、3pulse。