[发明专利]构建BRCA1基因突变的乳腺癌模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用

权利要求书

1.一种试剂盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白；

所述BRCA1-gRNA3为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：16中第3-22位核苷酸所示；所述BRCA1-gRNA4为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：17中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备乳腺癌模型猪；(c)制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。

2.一种试剂盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和PRONCN蛋白；

BRCA1-gRNA3为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；

BRCA1-gRNA4为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；

所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备乳腺癌模型猪；(c)制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。

3.一种试剂盒，包括BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和特异质粒；

BRCA1-gRNA3为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；

BRCA1-gRNA4为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；

所述特异质粒自上游至下游依次包括如下元件：启动子、操纵子、核糖体结合位点、PRONCN蛋白的编码基因、终止子；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备乳腺癌模型猪；(c)制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。

4.BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用；

BRCA1-gRNA3为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备乳腺癌模型猪；(c)制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。

5.BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用；

BRCA1-gRNA3为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；PRONCN蛋白为权利要求2中所述的PRONCN蛋白；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备乳腺癌模型猪；(c)制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。

6.BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和特异质粒在制备试剂盒中的应用；

BRCA1-gRNA3为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；特异质粒为权利要求3中所述的特异质粒；

所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组细胞；(b)制备乳腺癌模型猪；(c)制备乳腺癌细胞模型或乳腺癌组织模型或乳腺癌器官模型。

7.一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：将BRCA1-gRNA3、BRCA1-gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞；BRCA1-gRNA3为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA3；BRCA1-gRNA4为权利要求1中所述的BRCA1-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白。