[发明专利]高产5-氨基乙酰丙酸的工程菌株及5-氨基乙酰丙酸高产菌株的构建方法

权利要求书

1.一种构建5-ALA高产工程菌株的方法，其特征在于，增强菌株中5-氨基乙酰丙酸合成酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、5-ALA转运蛋白以及5-ALA氧化损伤修复系统相关蛋白的活性，并且弱化或敲除琥珀酰辅酶A合成酶、5-氨基乙酰丙酸脱水酶以及异柠檬酸裂解酶的活性。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述增强5-氨基乙酰丙酸合成酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、泛酸激酶、5-ALA转运蛋白、5-ALA氧化损伤修复系统相关蛋白的活性是通过增加编码蛋白的多核苷酸的拷贝数、对编码蛋白的基因的调控序列进行修饰、用具有强活性的序列置换染色体上编码蛋白的基因的调控序列、用突变基因置换编码蛋白的基因、在染色体上编码蛋白质的基因中引入修饰以增强蛋白质的活性。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述弱化琥珀酰辅酶A合成酶、5-氨基乙酰丙酸脱水酶、异柠檬酸裂解酶的活性是通过部分或全部敲除酶的编码基因、基因突变失活或部分失活、基因启动子或翻译调控区改变令其转录或翻译弱化、改变基因序列使其mRNA稳定性减弱或酶结构不稳定、通过sRNA对基因进行弱化调控、通过外源性添加酶活性的抑制剂以弱化其活性。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述5-ALA转运蛋白是半胱氨酸/O-乙酰丝氨酸转运蛋白，所述5-ALA氧化损伤修复系统相关蛋白是谷氧还蛋白I。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述5-氨基乙酰丙酸合成酶的氨基酸序列如SEQ ID No：49所示，或所述5-氨基乙酰丙酸合成酶的氨基酸序列如SEQ ID No：49所示序列的75位由半胱氨酸突变为丙氨酸，第365位的精氨酸突变为赖氨酸。

6.如权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述菌株为大肠杆菌或谷氨酸棒杆菌。

7.一种高产5-ALA的重组工程菌株，其特征在于，由如权利要求1至6任一项所述的方法制备得到。

8.一种生产5-ALA的方法，其特征在于，发酵培养如权利要求7所述的5-ALA重组工程菌株以产生5-ALA。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，还包括从培养基中分离5-ALA的步骤。

10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的发酵培养基为KH₂PO₄ 5g/L，NH₄Cl 8 g/L，酵母粉 5 g/L，MgSO₄ 0.5 g/L，0.01 g/L泛酸钙，消泡剂0.1 g/L和葡萄糖20 g/L。