[发明专利]一种用于BCR基因重排检测的参考品及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

取IgH、IgK和IgL重排组合不同的BCR基因样本，所述BCR基因样本选自肿瘤细胞系、肿瘤细胞系中基因组或人工合成的BCR基因；

利用ddPCR对所述BCR基因样本中BCR基因进行定量，得到各BCR基因样本中BCR基因的拷贝数，按检测需求的BCR基因的拷贝数比例，将各BCR基因样本混合，即得到所述用于BCR基因重排检测的参考品。

2.根据权利要求1所述的用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法，其特征在于，所述肿瘤细胞系包括急性淋巴白血病细胞系和/或多发性骨髓瘤细胞系。

3.根据权利要求1所述的用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法，其特征在于，所述BCR基因样本选自IGHV3-11*06基因、IGHV3-53*01基因、IGHV3-25*01基因、IGHV3-21*06基因、IGHV3-64*02基因、IGHV3-23*02基因、IGHV3-73*01基因、IGHV3-23*01基因、IGHV3-64*01基因、IGHV1-8*01基因、IGHV4-28*01基因、IGHV6-1*01基因、IGKV1-12*01基因、IGKV1-27*01基因、IGKV1-5*01基因、IGKV1D-13*01基因、IGKV1D-33*01基因、IGKV1-NL1*01基因、IGKV2D-40*01基因、IGKV5-2*01基因、IGKV6-21*01基因、IGLV1-47*02基因、IGLV2-11*01基因、IGLV3-25*02基因、IGLV10-54*02基因、IGLV8-61*01基因、IGLV6-57*02基因、IGLV4-60*03基因或IGLV3-25*02基因中的任意一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求1所述的用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法，其特征在于，所述ddPCR的程序为：

抗干扰：93～98℃、8～12min；

预变性：93～98℃、25～35s；

变性：55～65℃、55～65s，30～50个循环；

退火、延伸：10～15℃。

5.根据权利要求2所述的用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法，其特征在于，所述急性淋巴白血病细胞系包括Reh和/或SUP-B15，所述多发性骨髓瘤细胞系包括IM-9和/或U266B1。

6.根据权利要求5所述的用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法，其特征在于，所述急性淋巴白血病细胞系的ddPCR的上游引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.5所示的序列，下游引物的核酸序列包括SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4或SEQ IDNO.6所示的序列，探针包括SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.9所示的序列中任意一种。

7.根据权利要求5所述的用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法，其特征在于，所述多发性骨髓瘤细胞系的ddPCR的上游引物的核酸序列包括SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.15所示的序列，下游引物的核酸序列包括SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13或SEQID NO.16所示的序列，探针包括SEQ ID NO.16～SEQ ID NO.18所示的序列中任意一种。

8.一种用于BCR基因重排检测的参考品，其特征在于，所述参考品由权利要求1-7任一项所述的用于BCR基因重排检测的参考品的制备方法制备得到。

9.权利要求8所述的用于BCR基因重排检测的参考品在制备BCR基因重排检测产品中的应用。

10.权利要求8所述的用于BCR基因重排检测的参考品在以非疾病诊断和/或治疗为目的的BCR基因重排检测中的应用。