[发明专利]抗苎麻花叶病毒的抗血清及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗苎麻花叶病毒的抗血清，其特征在于，所述抗血清以RaMoV CP蛋白作为免疫原免疫大白兔得到，所述RaMoV CP蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一种权利要求1所述的抗血清的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以RaMoV CP基因为模板设计引物对，对感染RaMoV植物的cDNA进行PCR扩增得到扩增产物；

(2)酶切载体和所述扩增产物，用连接酶连接得到重组载体；

(3)将所述重组载体转化至感受态细胞中得到转化产物；

(4)从所述转化产物分离出RaMoV CP重组蛋白。

(5)将所述的RaMoV CP重组蛋白免疫大白兔获得多克隆抗体，即为抗苎麻花叶病毒的抗血清。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物为SEQ ID NO.4所示的DNA序列；所述下游引物为SEQ IDNO.5所示的DNA序列。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述载体为pET30a。

5.一种权利要求1所述的抗血清在制备检测苎麻花叶病毒的检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测试剂盒的成分包括：PBST缓冲液、封闭液、辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗、显色液和显色终止液；所述封闭液为含1％BSA的PBST缓冲液；所述显色液为3,3',5,5'-四甲基联苯胺；所述显色终止液为用无菌水配制的浓度为2M的硫酸溶液。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用为ID-ELISA检测，具体为：

S1-1、10×PBST缓冲液包被待测物，加入到酶标板中，用封闭液封闭；

S1-2、在酶标板中加入含有苎麻花叶病毒抗血清的一抗溶液，进行孵育；

S1-3、在酶标板中加入辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗的溶液，进行孵育；

S1-4、加入显色液进行显色，用酶标仪检测OD450nm吸光值，OD 450nm吸光值≥2.5倍为阳性，反应孔OD 450nm吸光值＜2.5倍为阴性。

7.一种权利要求1所述的抗血清在制备检测苎麻花叶病毒的检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测试剂盒的成分包括：PBS缓冲液、封闭液、碱性过氧化物酶标记羊抗兔二抗、显色液；所述封闭液为含1％BSA的PBST缓冲液，所述显色液的成分为：0.1M NaHCO₃、0.001M MgCl₂、0.3g/L NBT(四唑氮兰)和0.15g/L BCIP(5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐)。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用为Dot-ELISA检测，具体为：

S2-1、将待检测物用PBS缓冲液研磨得到抗原溶液，将所述抗原溶液点在NC膜上用封闭液封闭；

S2-2、在NC膜上加入含有苎麻花叶病毒抗血清的一抗溶液，进行孵育；

S2-3、在酶标板中加入碱性过氧化物酶标记羊抗兔二抗的溶液，进行孵育；

S2-4、加入显色液进行显色，颜色为深蓝色至蓝紫色为阳性。