[发明专利]抗苎麻花叶病毒的抗血清及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗苎麻花叶病毒的抗血清及其制备方法和应用，抗血清以RaMoV CP蛋白作为免疫原免疫大白兔得到，RaMoV CP蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.3所示。其制备方法以RaMoV CP基因为模板，通过PCR扩增得到扩增产物、酶切、连接、转化、分离得到RaMoV CP蛋白，将PepMoV CP重组蛋白作为免疫原免疫大白兔得到抗血清。本发明的抗血清可应用于苎麻花叶病毒的检测，该方法可以实现快速、高通量检测，具有快速简便、特异性强、灵敏度高、检测结果可靠的优点，可用于生产上该病毒的快速检测和预测预报。

技术领域

本发明涉及植物保护技术领域，尤其涉及一种抗苎麻花叶病毒的抗血清及其制备方法和应用。

背景技术

苎麻花叶病毒(Ramie mosaic virus，RaMoV)属双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金黄花叶病毒属(Begomovirus)，自然条件下，只能通过介体昆虫烟粉虱传播。该病毒在自然条件下可侵染苎麻和烟草，严重危害苎麻和烟草的产量和品质。苎麻作为我国的重要经济作物，种植历史悠久，野生苎麻和家麻的种植区域均非常广泛，且在自然环境下生活能力极强；烟草的经济附加值高，在我国种植范围广。被该病毒感染的烟草出现植株矮化、叶片皱缩、植物顶端不发育继而死亡等症状。因而由烟粉虱广泛传播的RaMoV感染苎麻、烟草等经济作物所带来的危害隐患不可小觑，一旦在田间爆发，损失将严重难以估算。同时双生病毒重组率较高，一旦RaMoV与烟粉虱传播的多种病毒发生重组，产生的危害将更为严重。

植物病毒病，目前生产上还缺乏有效的防控技术措施，预防是控制植物病毒病的最佳方法。建立高通量、快速的检测方法是预防植物病毒病最关键的技术之一。血清学方法具有这些优点，且广泛的应用于植物病毒的检测与病害诊断。目前没有应用于检测我国RaMoV分离物的快速血清学检测方法。

发明内容

本发明针对上述需要解决的技术问题，提供了一种抗苎麻花叶病毒的抗血清及其制备方法和应用。

为了实现上述目的，本发明提供了一种抗苎麻花叶病毒的抗血清，所述抗血清以RaMoV CP蛋白作为免疫原免疫大白兔得到，所述RaMoV CP蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.3所示。

基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种所述的抗血清的制备方法，包括以下步骤：

(1)以RaMoV CP基因为模板设计引物对，对感染RaMoV植物的cDNA进行PCR扩增得到扩增产物；

(2)酶切载体和所述扩增产物，用连接酶连接得到重组载体；

(3)将所述重组载体转化至感受态细胞中得到转化产物；

(4)从所述转化产物分离出RaMoV CP重组蛋白。

(5)将所述的RaMoV CP重组蛋白免疫大白兔获得多克隆抗体，即为抗苎麻花叶病毒的抗血清。

上述的制备方法，进一步的，所述步骤(1)中所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物为SEQ ID NO.4所示的DNA序列；所述下游引物为SEQ ID NO.5所示的DNA序列。

上述的制备方法，进一步的，所述步骤(2)中所述载体为pET30a。

基于一个总的技术构思，本发明还提供了一种所述的抗血清在制备检测苎麻花叶病毒的检测试剂盒中的应用，所述检测试剂盒的成分包括：PBST缓冲液、封闭液、辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗、显色液和显色终止液；所述封闭液为含1％BSA的PBST缓冲液；所述显色液为3,3',5,5'-四甲基联苯胺；所述显色终止液为用无菌水配制的浓度为2M的硫酸溶液。

上述的应用，进一步的，所述应用为ID-ELISA检测，具体为：

S1-1、10×PBST缓冲液包被待测物，加入到酶标板中，用封闭液封闭；