[发明专利]一种用斑马鱼评价乳制品中溴氰菊酯毒性水平的方法

权利要求书

1.一种用斑马鱼评价乳制品中溴氰菊酯毒性水平的方法，其特征在于，包括依次进行的以下步骤：

S1.制备梯度浓度的溴氰菊酯标准样品暴露液；

S2.将斑马鱼胚胎暴露在溴氰菊酯标准样品暴露液中培养；

S3.观测斑马鱼发育情况，拟合溴氰菊酯浓度-斑马鱼发育情况曲线，确定检出限；

S4.将斑马鱼胚胎暴露在待测乳制品暴露液中培养，观测斑马鱼发育情况，将数据代入溴氰菊酯浓度-斑马鱼发育情况曲线，即可检测出待测乳制品中溴氰菊酯毒性水平，当数值大于检出限时报阳性检出。

2.根据权利要求1所述的一种用斑马鱼评价乳制品中溴氰菊酯毒性水平的方法，其特征在于，所述观测斑马鱼发育情况，观测指标包括孵化率、体长、头部面积、眼部面积、节间血管长度、背侧纵向吻合血管长度、心包水肿比例、心包面积和SV-BA距离。

3.根据权利要求1或2所述的一种用斑马鱼评价乳制品中溴氰菊酯毒性水平的方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：

用经过处理的乳制品和二甲基亚砜作为溶剂将溴氰菊酯配置成不同浓度的标准样品浓缩液，再用培养水稀释，即得所述溴氰菊酯标准样品暴露液。

4.根据权利要求3所述的一种用斑马鱼评价乳制品中溴氰菊酯毒性水平的方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：

选择转基因斑马鱼与野生AB型斑马鱼进行侧交，取得受精卵，挑选发育正常的胚胎分别放入经培养水稀释的溶剂和不同浓度的溴氰菊酯标准样品暴露液中，每组设置平行样，27~28℃恒温培养24~72h。

5.根据权利要求3所述的一种用斑马鱼评价乳制品中溴氰菊酯毒性水平的方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括：

S31.将斑马鱼幼鱼摆放至两眼重合的侧卧位进行观测，若未孵化，则将膜挑破，再将斑马鱼幼鱼摆放至两眼重合的侧卧位进行观测，采集图像；

S32.将采集的图像利用Image J软件分析，数据进行标准化，利用主成分降维后，利用最小二乘法进行拟合，即得溴氰菊酯浓度-斑马鱼发育情况曲线；

S33.选择与经培养水稀释的溶剂中的斑马鱼幼鱼差异显著的溴氰菊酯标准样品暴露液的浓度作为检出限。