[发明专利]一种检测Hg2+

权利要求书

1.一种检测Hg²⁺的生物传感器，其特征在于，包括以下组分：

发卡探针，所述发卡探针含有切刻内切酶Nb.BbvCI的半识别位点序列和G-四链体序列；

引物探针，所述引物探针与所述发卡探针的一部分互补。

2.如权利要求1所述的检测Hg²⁺的生物传感器，其特征在于，所述生物传感器还包括硫黄素T、T4连接酶、Bst聚合酶和切刻内切酶Nb.BbvCI。

3.如权利要求1所述的检测Hg²⁺的生物传感器，其特征在于，所述发卡探针的序列为：P-GTTGTTAGGGATAGGGATAGGGATAGGGATTCTTCGTCGTCTTGCTGGTGTGGTGGCTGCTGAGGAAGACGAC，序列中的粗体字母表示切刻内切酶Nb.BbvCI的识别位点，下划线字母表示G-四链体序列。

4.如权利要求1所述的检测Hg²⁺的生物传感器，其特征在于，所述引物探针的序列为：AGCCACCACACCAGCAAGACGAC。

5.权利要求1-4任一项所述检测Hg²⁺的生物传感器在检测Hg²⁺中的应用。

6.一种西洋参水浸出液中Hg²⁺的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求1-4任一项所述检测Hg²⁺的生物传感器进行检测：

1)将西洋参饮片加水煮沸，取溶液部分得到西洋参水浸出液，将浸出液定容得到待检测样品；

2)在T4连接酶反应缓冲液中，将发卡探针和待检测样品培养一段时间后加入T4连接酶，室温下反应，然后加热使T4连接酶失活；

3)向步骤2)得到的混合物中加入引物探针、脱氧核糖核苷5’-三磷酸混合物和Bst聚合酶，并在反应缓冲液中反应一段时间；反应完成后加入切刻内切酶Nb.BbvCI继续反应一段时间；

4)向步骤3)得到的混合物中加入硫黄素T，并在一定温度下保持一段时间；

5)对步骤4)得到的溶液进行荧光光谱检测。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤2)中的T4连接酶反应缓冲液的组成为50mM Tris-HCl(pH 7.5@25℃)，10mM MgCl₂，10mM DTT，1mM ATP。

8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤3)中的反应缓冲液的组成为20mMTris-HAc(pH 7.9)、100μg mL^-1BSA、50mM KAc、10mM Mg(Ac)₂。

9.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤4)中加入硫黄素T的同时还加入KCl和H₂O。

10.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤5)的具体方法为采用荧光分光光度计在425nm激发波长下，记录450-550nm荧光光谱区域的信号。