[发明专利]一种胃间质瘤类器官培养基及培养方法

权利要求书

1.一种胃间质瘤类器官培养基，其特征在于：是由基础细胞因子、特异性细胞因子、抑制剂、原代细胞抗生素和基质胶组成；按照终浓度组成，所述基础细胞因子组成是：10-100ng/ml的EGF，20-500ng/ml的Noggin，20-500ng/ml的R-spondin 1，20-500ng/ml的Wnt3a；所述特异性细胞因子组成是1-50ng/ml的SCF，10-200ng/ml的IGF-1，1-50ng/ml的CCBE1，所述抑制剂组成是：100-2000nM的CHIR99021，1-40μM的A83-01，2-50μM的Y-27632

dihydrochloride，所述原代细胞抗生素浓度为100ug/ml；所述基质胶为体积浓度为1％的Matrigel，以上成分均溶于DMEM/F12培养基中。

2.根据权利要求1所述的一种胃间质瘤类器官培养基，其特征在于，按照终浓度组成，所述基础细胞因子组成是：10ng/ml的EGF，20ng/ml的Noggin，20ng/ml的R-spondin 1，20ng/ml的Wnt3a；所述特异性细胞因子组成是1ng/ml的SCF，10ng/ml的IGF-1，50ng/ml的CCBE1，所述原代细胞抗生素浓度为100ug/ml；所述基质胶为体积浓度为1％的Matrigel，所述抑制剂组成是：100nM的CHIR99021，1μM的A83-01，50μM的Y-27632dihydrochloride，以上成分均溶于DMEM/F12培养基中。

3.一种胃间质瘤类器官培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

①将新鲜来源的手术切除标本进行预处理，得到细胞数量为3-50个细胞的细胞团后，离心去除上清，收集细胞沉淀备用；

②取适量权利要求1所述的胃间质瘤类器官培养基，重悬步骤①获得的细胞沉淀，得到细胞悬液；

③将步骤②获得的细胞悬液滴加到细胞培养装置中，在转速为20-200rpm，温度为37℃，CO₂浓度为5％的环境下进行培养；

④每隔2-3天更换一次权利要求1所述的胃间质瘤类器官培养基，培养4-7天后，得到胃间质瘤类器官。

4.根据权利要求3所述的一种胃间质瘤类器官培养方法，其特征在于：所述步骤①的预处理步骤包括：将标本经过多次生理盐水洗涤后切碎，加入消化液，直至将标本消化成大部分为3-50个细胞的细胞团后，加入HBSS缓冲液稀释并滤除残渣和杂质。

5.根据权利要求3所述的一种胃间质瘤类器官培养方法，其特征在于：所述步骤②中是按每1-10×10⁵细胞使用2ml培养基重悬步骤①获得的细胞沉淀。

6.根据权利要求5所述的一种胃间质瘤类器官培养方法，其特征在于：所述步骤②中是按每2×10⁵细胞使用2ml培养基重悬步骤①获得的细胞沉淀。

7.根据权利要求3所述的一种胃间质瘤类器官培养方法，其特征在于：所述步骤③中是将细胞培养装置置于摇床上。

8.根据权利要求7所述的一种胃间质瘤类器官培养方法，其特征在于：所述摇床转速为100rpm。

9.根据权利要求8所述的一种胃间质瘤类器官培养方法，其特征在于：所述细胞培养装置是30mm超低粘附培养皿。