[发明专利]一种作用于凝血酶的抗凝药物检测试剂盒及其应用

说明书

本发明适用于生物医学检验测定技术领域，提供了一种作用于凝血酶的抗凝药物检测试剂盒，包括第一功能试剂和第二功能试剂；所述第一功能试剂包含改性凝血酶；所述改性凝血酶的肝素和/或ATIII和/或纤维蛋白原的结合位点完全或部分封闭；所述改性凝血酶表现出对肝素和/或ATIII浓度变化的不敏感性；所述第二功能试剂包含至少一种凝血酶底物；所述凝血酶底物可以与作用于凝血酶的抗凝药物竞争结合改性后凝血酶。本发明的第一功能试剂与第二功能试剂联合使用，可以有效的抑制样本中肝素和或ATIII和或纤维蛋白原对作用于凝血酶的抗凝药物检测的干扰。本发明的试剂盒检测准确率高，重复性好，而且检测步骤简单，有效提高了检测效率。

技术领域

本发明属于生物医学检验测定技术领域，尤其涉及一种作用于凝血酶的抗凝药物检测试剂盒。

背景技术

目前抗凝剂可以根据作用靶点，将其分为两类：作用于Xa因子的抗凝药物和作用于凝血酶的抗凝药物。其中，作用于凝血酶的抗凝药物，如达比加群，已有相关专利报道。

专利CN 114277089 A公开了一种基于凝固法来检测达比加群的试剂盒，达比加群可结合于凝血酶的纤维蛋白特异结合位点，阻止纤维蛋白原裂解为纤维蛋白，从而使凝固时间延长。凝固时间与达比加群的浓度呈正相关，此外还通过添加肝素中和剂来提高试剂抗肝素干扰的性能。但在实际临床应用中，血浆中组分十分复杂，且在不同人群存在一定的差异，如纤维蛋白原作为凝固法检测的基础，其含量的差异会影响样本的凝固时间，从而导致测试结果出现偏差。

专利CN 107167439 A公开了一种基于发色底物法来检测达比加群的试剂盒，通过在血浆中加入蛇静脉酶用于作用在凝血酶原上，产生一种具有裂解活性的酶，这种酶裂解其发色底物，得到吸光度信号。血浆中的达比加群抑制这种酶,而达比加群含量越高,对这种酶的抑制越强，得到的吸光度信号越弱。所以在一定的范围之内, 达比加群的含量和吸光度的信号是负相关关系。虽然这种方法可以有效避免纤维蛋白原的含量差异对结果的影响，但其产生的酶的活力还会受到样本中的肝素或ATIII的影响，从而导致最终测试结果的准确性降低。

药物浓度的准确检测在血栓与止血病人进行治疗用药指导方向具有重要临床意义，不准确或错误的结果会影响抗凝或纤溶药物使用的判断，危及患者的生命。因此，当前在血栓与止血相关临床用药监测领域迫切需求一种可以准确监测作用于凝血酶抗凝药物的含量且易于获得的检测试剂盒。

发明内容

本发明实施例提供一种作用于凝血酶的抗凝药物检测试剂盒，旨在解决现有作用于凝血酶的抗凝药物检测方法存在的检测准确性不理想，成本高和使用过程复杂等技术问题。

一种作用于凝血酶的抗凝药物检测试剂盒，包括第一功能试剂和第二功能试剂；

所述第一功能试剂包含长链化合物改性凝血酶；所述长链化合物改性凝血酶的肝素和/或ATIII和/或纤维蛋白原的结合位点完全或部分封闭；所述长链化合物改性凝血酶表现出对肝素和/或ATIII浓度或活性变化的不敏感性。

所述第二功能试剂包含至少一种凝血酶底物；所述凝血酶底物可以与作用于凝血酶的抗凝药物竞争结合长链化合物改性凝血酶。

进一步地，所述长链化合物改性凝血酶通过长链化合物共价结合于凝血酶制备得到。

更进一步地，待改性的凝血酶与长链化合物的结合位点为氨基，所述长链化合物包括但不限于分子量大于500的聚醇类试剂、酰卤类试剂、醛类试剂、卤甲基类试剂、酸酐类试剂、环氧基类试剂、有机酸类试剂中的一种或者多种；

更进一步地，待改性的凝血酶与长链化合物的结合位点为羧基，所述长链化合物为与羧基具备共价结合能力的基团和亲水基团或负电荷基团的长链化合物，包括但不限于分子量大于500，且富含亲水基团或负电荷基团的氨基酸类试剂、聚醇类试剂中的一种或者多种。

进一步地，所述长链化合物改性凝血酶的蛋白条带灰度分布峰值对应的分子量需大于40KDa。