[发明专利]一种分子桥介导的赭曲霉毒素A检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种赭曲霉毒素A检测方法，其组成包括血红素、生色底物、识别探针Apt、Mg²⁺离子依赖性DNA酶和DNA底物HP，其特征在于其组成还包括分子桥，所述的识别探针Apt和所述的Mg²⁺离子依赖性DNA酶通过所述分子桥结合形成稳定四链体复合物；所述赭曲霉毒素A特异性结合识别探针Apt，释放出的Mg²⁺离子依赖性DNA酶催化所述DNA底物HP，生成大量的富G序列与所述血红素结合，催化所述生色底物显色。

2.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A检测方法，其特征在于所述识别探针Apt为SEQID NO:1所示序列，所述辅助探针DNA1为SEQ ID NO:2所示序列，所述辅助探针DNA2为SEQID NO:3所示序列，所述Mg²⁺离子依赖性DNA酶为SEQ ID NO:4所示序列，所述DNA底物HP为SEQ ID NO:5所示序列。

3.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A检测方法，其特征在于所述生色底物为2,2’-联氨-二[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]二氨盐和过氧化氢。

4.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A检测方法，包括以下步骤：

(1)所述的识别探针Apt、辅助探针DNA1、辅助探针DNA2、Mg²⁺离子依赖性DNA酶退火处理；

(2)DNA底物HP退火处理形成发卡结构；

(3)将经步骤(1)处理的所述识别探针Apt、辅助探针DNA1、辅助探针DNA2、Mg²⁺离子依赖性DNA酶混合，室温下反应形成四链体复合物；

(4)待测样本加入经步骤(3)处理所得的四链体复合物和经步骤(2)处理的DNA底物HP；

(5)将所述的血红素和生色底物加入反应溶液；

(6)紫外可见分光光度计测定420nm的吸光度。

5.根据权利要求4所述赭曲霉毒素A检测方法，其特征在于所述退火处理为95℃水浴5min，缓慢冷却至室温。

6.根据权利要求1～5所述的任一赭曲霉毒素A检测方法，其特征在于所述识别探针Apt、辅助探针DNA1、辅助探针DNA2、Mg²⁺离子依赖性DNA酶浓度均为25nM，所述DNA底物HP浓度为125nM，所述2,2’-联氨-二[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]二氨盐和过氧化氢浓度分别为2mM和1mM。

7.一种赭曲霉毒素A检测试剂盒，其特征包括权利要求1所述的组成成分。

8.根据权利要求7所述的赭曲霉毒素A检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第一容器，所述第一容器内含有所述的识别探针Apt、辅助探针DNA1、辅助探针DNA2、Mg²⁺离子依赖性DNA酶形成的四链体复合物；

所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内含有所述DNA底物HP；

所述试剂盒还包括第三容器，所述第三容器内含有所述血红素；

所述试剂盒还包括第四容器，所述第四容器内含有所述生色底物2,2’-联氮-二[3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸]二铵盐；

所述试剂盒还包括第五容器，所述第五容器内含有生色底物过氧化氢；

所述试剂盒还包括第六容器，所述第六容器包含所述Tris-HCl缓冲液。

9.一种赭曲霉毒素A检测试剂盒的使用方法，其特征包括权利要求8所述的赭曲霉毒素A检测试剂盒，还包括如下步骤：

(1)分别取所述第一、第二容器中溶液10μL和50μL加入待测溶液中，37℃反应120min；

(2)加入所述第三容器中溶液50μL，室温反应30min；

(3)加入所述第四容器中溶液80μL和所述第五容器中溶液40μL，室温反应5min；

(4)加入所述第六容器中溶液170μL，紫外可见分光光度计测定420nm处的吸光度。