[发明专利]一种抗体偶联药物连接子的合成方法

说明书

本发明提供了一种抗体偶联药物连接子的制备方法，其包括以下步骤：以Fmoc‑缬氨酸‑琥珀酰亚胺酯(Fmoc‑Val‑OSu)为起始原料，经过氨解反应、酰胺化、脱保护、氨解反应及酯交换反应合成Mc‑Val‑Cit‑PABC‑PNP，本发明提供了一条简便的合成路线，并对各步产物的纯化方法进行了优化。优化后的合成工艺原料易得，收率得到提高，改进了原研路线使用大量乙醚而不适于放大生产的弊端，更适合工业化大规模生产。

技术领域

本发明涉及一种制备抗体偶联药物连接子的工业化方法，尤其涉及一种Mc-Val-Cit-PABC-PNP连接子的制备方法，属于药物化学合成技术领域。

背景技术

抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate，ADC)是一种通过连接子将有生物活性的细胞毒性药物与单克隆抗体连接起来的新型靶向生物药。其作用机制一方面是抗体可高特异性靶向识别肿瘤抗原，静脉注射给药后，药物通过血液循环，分布到肿瘤组织并与肿瘤表面抗原结合，ADC与抗原的复合物经历内吞作用，将其携带的小分子细胞毒载荷内化到肿瘤细胞中，被转运到溶酶体以高效活性形式被释放，通过DNA损伤或抑制微管合成进而诱导癌细胞凋亡以实现肿瘤治疗的目的。另一方面是通过释放出可渗透性的游离小分子细胞毒素，通过被动扩散或细胞死亡后进入肿瘤环境中，对邻近的肿瘤细胞造成杀伤效果，即旁观者效应。

ADC除兼具抗体药物的精准靶向优势和小分子细胞毒药物的高效杀伤优势，还具有活性高、毒副作用小、作用时间长等优势，已经成为生物医药领域炙手可热的研发品种，近10年来取得了长足发展。

ADC由单克隆抗体(Antibody)、连接子(Linker)和细胞毒性药物(Cytotoxin)三个模块组成。单克隆抗体提供靶向定位，连接子确保ADC可在肿瘤细胞内高效释放细胞毒性药物、且在血液循环和靶外组织细胞中保持稳定，到达靶点后，小分子细胞毒性药物提供对肿瘤细胞的高效杀伤作用。连接子不仅是抗体与小分子细胞毒物之间形成共价连接的结构部分，而且是靶向药物治疗中具有设计性质的关键元件。

连接子会影响ADC的许多重要特性，如药物-抗体比值(DAR)、有效载荷释放时间、治疗指数(Therapeutic Index，TI)和药代动力学/药效学。根据肿瘤细胞内连接子的切割特性，可将连接子分为可切割和不可切割两种类型。可切割连接子利用肿瘤微环境特异性释放小分子毒素，包括腙类连接子、二硫化物连接子、酶可裂解型连接子。不可切割连接子通过细胞内溶酶体断开其与抗体的连接，依靠抗体的完全降解来释放。两种类型的连接子分别具有其优缺点：可切割连接子产生的代谢产物被动扩散更易进入胞内产生旁观者杀伤效应，对于靶抗原表达异质性的肿瘤有重要意义，但也会杀死目标肿瘤细胞附近的正常细胞或免疫细胞，在体内循环时可能存在一定程度的代谢降解进而导致脱靶毒性；不可切割连接子比可切割连接子更稳定，可减少脱靶毒性，但其更依赖于靶细胞的生物学特征，需要良好的内化过程才能在细胞内发生降解而激活，旁观者效应也会降低。

本发明涉及的连接子Mc-Val-Cit-PABC-PNP为酶可裂解的肽类连接子，此类连接子具有较高的血液循环稳定性和释放效率，连接子结构中链端的马来酰亚胺基和碳酸酯结构可以很容易地分别与抗体分子中的巯基和细胞毒性药物分子中的氨基结合形成ADC分子，非常便于ADC的合成和结构筛选研究工作。结构式如下：

自2000年首个ADC上市以来，截至目前共有12个ADC获批上市，其中使用Mc-Val-Cit-PABC-PNP连接子的就有4个，包括Adcetris(本妥昔单抗)、Polivy(泊洛妥珠单抗)、Padcev(恩诺单抗)和Tivdak(替索单抗)。目前有多达25个使用该结构连接子的分子处于临床阶段。并且在近期有关的专利研究报道中，有大量的ADC活性分子使用该连接子结构(PCTInt.Appl.,2021011834；2020256721；20210015941；2020132658；2020185069；2020095253；2020092617等)。可见该连接子的应用相当广泛。