[发明专利]一株出芽短梗霉菌株及其发酵法生产普鲁兰多糖的方法

说明书

本发明公开了一株出芽短梗霉菌株及其发酵法生产普鲁兰多糖的方法，属于微生物制药领域，具体涉及一株生产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株（Aureobasidium pullulans）EP1001，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.40158，及其生产普鲁兰多糖的方法。该方法以出芽短梗霉菌株EP1001为生产菌株，利用葡萄糖和蔗糖为复合碳源，发酵培养基采用纯无机盐组合配方，发酵周期在60hr‑96hr，生物量仅15g/L‑19 g/L，普鲁兰多糖产量64.0 g/L‑68.9 g/L，普鲁兰多糖产量与生物量的比值在3.62‑4.26之间，该菌株具有较高的底物糖利用和转化能力。

技术领域

本发明属于微生物制药领域，具体涉及一株出芽短梗霉菌株及其发酵法生产普鲁兰多糖的方法。

背景技术

2006年5月19日，国家卫生部发布了第8号公告，普鲁兰多糖为新增四种食品添加剂产品之一。日本Hayashibara 公司生物化学研究所同美国辉瑞 (Pfizer)公司合作，成功开发出以普鲁兰多糖为原料制成的硬质胶囊，第一次将普鲁兰多糖应用到医药领域，这种硬质胶囊新产品的崩散性、不透氧性和稳定性都很好。我国也于2020年，将普鲁兰多糖空心胶囊列入2020中国药典四部的药用辅料部分。国内普鲁兰多糖已在糖果、巧克力包衣、膜片和果蔬汁饮料等方面中得到应用。因此，普鲁兰多糖是一种具有极大经济价值和开发潜力的多功能新型生物材料，具有广阔的市场前景。

微生物发酵法生产普鲁兰多糖最初是在1959年由德国科学家Bender发现的。普鲁兰多糖(pulluans)是由出芽短梗霉(Aurebasidium pulluans)利用糖质化合物为基质进行好气发酵生产的一种粘性胞外多糖，无毒、无害、 无色、无味，耐热、耐盐、耐酸碱、黏度低、可塑性强、造膜性强、成膜性好和非常优良的增稠作用等特点，已广泛应用于医药、 食品、轻工、化工和石油等领域。

目前普鲁兰多糖产量提高主要是通过寻找高产菌株、构建基因工程菌、诱变筛选等为主，往往效果不太明显，发酵周期长，底物转化率不高，且整个发酵培养基都需要高温甚至超高温灭菌，蒸汽消耗量大，导致普鲁兰多糖生产成本居高不下。如何经济高效的采用出芽短梗霉发酵生产普鲁兰多糖，成为当前工业企业普遍关注的重点。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一株出芽短梗霉菌株及其发酵法生产普鲁兰多糖的方法，该菌株于2022年04月19日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（简称CGMCC）；保藏编号为 CGMCC No.40158，分类命名为出芽短梗霉Aureobasidium pullulans，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；发酵培养基采用纯无机盐组合配方，无需高温高压灭菌，该菌株的底物转化率高达68.9%，普鲁兰多糖产量与菌体生物量的比值在3.62-4.26左右，极大的提高了底物糖的利用效率和转化效率。

本发明一株出芽短梗霉菌株及其发酵法生产普鲁兰多糖的方法，主要包括以下步骤。

种子斜面培养：将保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为 CGMCCNo.40158的EP1001菌株，通过接种针以划线的方式接种到PDA斜面培养基中，进行活化培养；具体步骤是：将出芽短梗霉菌株EP1001从负八十冰箱中取出，冰上自然溶解，用接种针在无菌超净工作台上转接到PDA斜面培养基上，在恒温培养箱中30℃避光培养72小时。

液体种子培养：将步骤（1）中活化的出芽短梗霉菌株EP1001转接到液体种子培养基中培养16小时。具体步骤是：将PDA斜面培养基活化培养72小时的培养物接种于装有50ml液体种子培养基的250ml的三角瓶中，接种量2%，培养温度30℃，摇床转速220rpm，振荡培养16小时，获得出芽短梗霉菌株液体培养物。