[发明专利]一种致病基因WFS1突变位点的检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种致病基因WFS1突变位点的检测方法及试剂盒，其包括扩增检测其CDS区域的9个序列引物对；本发明结合Sanger测序技术，可快速地将WFS1基因CDS区域相关的突变检测出来，利用本发明完成的检测结果准确，可以完善Wolfram综合征的诊断，并为其治疗提供理论依据。

技术领域

本发明涉及分子生物学诊断技术领域，具体地说是涉及一种Wolfram综合征致病基因WFS1突变位点的检测方法、试剂盒及其用途。

背景技术

Wolframin ER跨膜糖蛋白(wolframin ER transmembrane glycoprotein，WFS1)，该蛋白可以负调节内质网应激。WFS1在胰岛β细胞和/或神经系统中高表达，其突变可以引起这些部位发生内质网应激反应，从而导致患者出现糖尿病、视神经萎缩、尿崩症和耳聋等临床表现，也就是Wolfram综合征(wolfram syndrome)。Wolfram综合征是一类常染色体隐性遗传疾病，WFS1突变是其已知遗传学病因。目前研究报道也发现Wolfram综合征的症状在不同病患之间表现多样，并且与起病年龄有关，临床上也发现了很多由WFS1突变所导致的单纯糖尿病表现病例。该病的临床表型复杂，仅仅依靠临床表型较难实现Wolfram综合征的精确诊断。

发明内容

为了解决现有临床诊断存在的问题，本发明提供了一种对WFS1突变位点的检测方法，对WFS1进行检测可为Wolfram综合征患者治疗提供依据，本发明通过Sanger测序法检测WFS1的CDS序列，分析验证WFS1突变情况，为Wolfram综合征患者诊疗提供依据。

一方面，本发明提供一种检测WFS1突变的引物系列，所述引物系列包括扩增WFS1第2-8外显子序列的引物对，其碱基序列分别为：

扩增WFS1第2外显子序列的引物对：

WFS1-Exon2-F:ttttctgtctccagcagacactaa

WFS1-Exon2-R:ccacccagctatccctgaacatc；

扩增WFS1第3外显子序列的引物对：

WFS1-Exon3-F:agcagatctgaagaccctcatgc

WFS1-Exon3-R:ggaaaactggcacagtgaacatgg；

扩增WFS1第4外显子序列的引物对：

WFS1-Exon4-F:tgacaaagggaagtgggtgaaag

WFS1-Exon4-R:caccagcgttaggtttggtaagattt；

扩增WFS1第5和第6外显子序列的引物对：

WFS1-Exon56-F:cgcgatgtcctcttgagtcag

WFS1-Exon56-R:tgggaggcacgggtgagata；

扩增WFS1第7外显子序列的引物对：

WFS1-Exon7-F:gcccatgctgttttctctcatgc

WFS1-Exon7-R:acggctgtaagacactctttgttagg；

扩增WFS1第8外显子序列的引物对1：

WFS1-Exon8-F1:cctcgttcccacgtaccatctt

WFS1-Exon8-R1:ccatcgaccagtgccatttcttc；

扩增WFS1第8外显子序列的引物对2：