[发明专利]一种致病基因WFS1突变位点的检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202210874770.3 | 申请日： | 2022-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN115141885A | 公开（公告）日： | 2022-10-04 |
| 发明（设计）人： | 韩秀群;李扬兮;张旭峰 | 申请（专利权）人： | 浙江麦大基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州盛飞专利代理事务所(特殊普通合伙) 33243 | 代理人： | 王玲华 |
| 地址： | 316100 浙江省舟山市普陀*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 致病 基因 wfs1 突变 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种检测WFS1突变的引物系列，其特征在于所述引物系列包括扩增WFS1第2-8外显子序列的引物对，其碱基序列分别为:
扩增WFS1第2外显子序列的引物对：
WFS1-Exon2-F:ttttctgtctccagcagacactaa
WFS1-Exon2-R:ccacccagctatccctgaacatc；
扩增WFS1第3外显子序列的引物对：
WFS1-Exon3-F:agcagatctgaagaccctcatgc
WFS1-Exon3-R:ggaaaactggcacagtgaacatgg；
扩增WFS1第4外显子序列的引物对：
WFS1-Exon4-F:tgacaaagggaagtgggtgaaag
WFS1-Exon4-R:caccagcgttaggtttggtaagattt；
扩增WFS1第5和第6外显子序列的引物对：
WFS1-Exon56-F:cgcgatgtcctcttgagtcag
WFS1-Exon56-R:tgggaggcacgggtgagata；
扩增WFS1第7外显子序列的引物对：
WFS1-Exon7-F:gcccatgctgttttctctcatgc
WFS1-Exon7-R:acggctgtaagacactctttgttagg；
扩增WFS1第8外显子序列的引物对1：
WFS1-Exon8-F1:cctcgttcccacgtaccatctt
WFS1-Exon8-R1:ccatcgaccagtgccatttcttc；
扩增WFS1第8外显子序列的引物对2：
WFS1-Exon8-F2:tcatcttctccttccccatcgcc
WFS1-Exon8-R2:ccaggatgaagcttgaccatgga；
扩增WFS1第8外显子序列的引物对3：
WFS1-Exon8-F3:tctctggagctcaccaagatcgc
WFS1-Exon8-R3:gcatgcccacggtaatctcaaa；
扩增WFS1第8外显子序列的引物对4：
WFS1-Exon8-F4:ctgccacatcaagaagttcgacc
WFS1-Exon8-R4:gtattcagagtggacagagctacaca。
2.一种致病基因WFS1突变位点的检测方法，其特征在于所述检测方法包括以下步骤：
(1)提取外周血中的基因组DNA；
(2)利用WFS1基因第2-8外显子引物对扩增步骤(1)中提取的DNA；
(3)对步骤(2)中的扩增产物进行测序；
(4)对测序结果进行比对，确定WFS1基因是否发生突变。
3.如权利要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法，其特征在于所述步骤(1)中抽提外周血中的基因组DNA可采用商业的试剂盒，优选为血液基因组DNA抽提试剂盒，由生工生物工程(上海)股份有限公司生产。
4.如权利要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法，其特征在于所述步骤(2)中PCR扩增的扩增体系中添加了DMSO；所述DMSO添加的体积占总扩增体系体积的5％-10％，优选5.2％。
5.如权利要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法，其特征在于所述步骤(2)中PCR扩增的扩增体系为：
6.如权利要求2所述一种致病基因WFS1突变位点的检测方法，其特征在于所述步骤(2)中PCR扩增的扩增条件：
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