[发明专利]一种医用级Ⅲ型胶原蛋白的制备方法和Ⅲ型胶原蛋白

说明书

本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种医用级Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，包含如下步骤：动物胎盘组织预处理、脱细胞、脱脂、除杂、酶切、盐析纯化、脱盐浓缩；所述的盐析方法为：在碱性条件下对含有Ⅲ型胶原蛋白的动物源胶原蛋白混合物进行盐析，一步盐析即可得到高纯度的Ⅲ型胶原蛋白，纯度达到95％以上；制备得到的动物胎盘Ⅲ型胶原蛋白具有良好的三螺旋结构以及特征性的纤维网状结构；内毒素含量低于0.5Eu/mL，达到医用标准；可应用于活性护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、医疗器械、保健食品等领域。

技术领域

本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种医用级Ⅲ型胶原蛋白的制备方法和Ⅲ型胶原蛋白。

背景技术

胶原蛋白是动物体内含量最多、分布最广的蛋白质，是结缔组织的主要组成成分。Ⅲ型胶原蛋白是一种间质胶原，由3条α₁(Ⅲ)链组成。它是皮肤、血管等组织的主要纤维蛋白成分之一。Ⅲ型胶原蛋白通常与Ⅰ型胶原蛋白共生，作为一种伴生胶原蛋白，Ⅲ型胶原蛋白在哺乳动物体内多以富有弹性的薄纤维层的形式与Ⅰ型胶原形成纤维组织。Ⅲ型胶原蛋白在人体创伤愈合、组织修复中发挥重要作用，在皮肤修复敷料中有良好的应用效果。Ⅲ型胶原蛋白呈现出独特的三螺旋结构，三螺旋结构是Ⅲ型胶原蛋白具有良好生物功能的关键因素。因此，从动物组织中提取Ⅲ型胶原蛋白的关键，是在保证其纯度的前提下，在提取过程中保持Ⅲ型胶原蛋白的结构完整性，防止其发生变性。同时，作为医用材料的Ⅲ型胶原蛋白，对于纯度和安全性均有严格的要求，对胶原蛋白中含有的内毒素等成分含量也设置了严格的行业标准。

胎盘是哺乳类胎生动物在怀胎时为胎儿供应养分、让胚胎生长的特殊组织，它在分娩时排出体外，胎盘在我国入药已有几千年的历史。哺乳动物胎盘含有丰富的胶原蛋白成分，其中Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型胶原蛋白的含量占比最高。中国专利CN1030528C利用胃蛋白酶，从人胎盘中提取得到不同类型胶原蛋白的混合物，其中Ⅲ型胶原蛋白的含量低。中国专利CN101717804B从新生犊牛皮中提取制备Ⅲ型胶原蛋白，该方法使用高浓度的盐酸胍和加热使胶原蛋白发生变性，丧失胶原蛋白生物功能必需的三螺旋结构。如何高效制备高纯度、具有完整三螺旋结构的III型胶原蛋白亟待研究。

盐析是蛋白质纯化的重要方法。目前已建立包含复溶、盐析沉淀、复溶脱盐步骤的多步盐析纯化工艺，从胶原蛋白混合物中纯化得到单一类型的胶原蛋白。然而，该工艺步骤繁琐、周期长，盐析都是在酸性或者中性条件下进行。发明专利CN103772734A公开的高纯度胶原蛋白海绵的制备方法中，盐析是在pH值为7.0条件下进行；发明专利CN111748030A公开的一种可溶性非变性II型胶原蛋白及其制备方法，盐析是在pH值为2.0-7.0条件下进行的；发明专利CN113061178A公开的梅花鹿鹿皮胶原蛋白及胶原蛋白肽的制备方法中，盐析是在pH为7.0条件下进行的；发明专利CN103882082B公开的一种I型和V型胶原蛋白的制备方法中，盐析是在pH为7.5条件下进行的。

发明人在研究过程中意外的发现，在碱性条件下，对含有Ⅲ型胶原蛋白的动物胶原蛋白混合物进行盐析，可以一步得到高纯度Ⅲ型动物胶原蛋白，且制备得到的Ⅲ型动物胶原蛋白，纯度达到95％以上；其保持良好的三螺旋结构，为非变性Ⅲ型胶原蛋白，并且内毒素含量低于0.5Eu/mL，达到医用标准；可用于制备护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、医疗器械、保健食品等。

发明内容

针对以上技术问题，本发明的目的在于提供一种从动物组织中提取制备Ⅲ型胶原蛋白的方法，制备方法为：在碱性条件下，对含有Ⅲ型胶原蛋白的动物胶原蛋白混合物进行盐析，得到高纯度Ⅲ型胶原蛋白。

优选的，盐析条件：pH为：8.5-10.0，盐浓度为：0.1-1.5M。

优选的，所述动物组织为动物胎盘。