[发明专利]一种医用级Ⅲ型胶原蛋白的制备方法和Ⅲ型胶原蛋白

权利要求书

1.一种从动物组织中提取制备Ⅲ型胶原蛋白的方法，其特征在于，制备方法为：在碱性条件下，对含有Ⅲ型胶原蛋白的动物胶原蛋白混合物进行盐析，得到高纯度Ⅲ型胶原蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，盐析条件：pH为：8.5-10.0，盐浓度为：0.1-1.5M。

3.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述动物组织为动物胎盘。

4.一种Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：动物胎盘组织预处理、脱细胞、脱脂、除杂、酶切、盐析纯化、脱盐浓缩，所述的盐析方法为：在碱性条件下对含有Ⅲ型胶原蛋白的动物胶原蛋白混合物进行盐析，盐析条件：pH为：8.5-10.0，盐浓度为：0.1-1.5M。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的脱细胞方法为：用酸溶液，和/或盐溶液，和/或缓冲溶液，和/或表面活性剂，和/或过氧化物溶液处理动物胎盘组织；所述脱脂方法为：用正丁醇，和/或氯仿-甲醇溶液，和/或氯仿-甲醇-水溶液，和/或乙醚，和/或正己烷，和/或丙酮，和/或乙醇-正己烷溶液，和/或乙醇溶液，和/或表面活性剂处理动物胎盘组织；所述除杂方法为：用氢氧化钠溶液，和/或氢氧化钾溶液处理动物胎盘。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)动物胎盘预处理：将动物胎盘切碎为小块，在纯化水中洗涤除去杂质和组织外血液残留；

(2)脱细胞：通过定速搅拌的方法在容器中依次利用NaCl溶液、表面活性剂溶液和过氧化物溶液对预处理后的动物胎盘进行脱细胞处理；

(3)脱脂：通过定速搅拌的方法在新配制的浓度为5％-30％v/v的正丁醇溶液中处理脱细胞处理后的动物胎盘碎片3-5次，每次6-18h；

(4)除杂：通过定速搅拌的方法在0.01-2.0M的氢氧化钠溶液中对脱脂后的动物胎盘碎片0.5-72h进行杂蛋白去除处理；

(5)酶切：采用酶切法提取经过除杂处理后的动物胎盘中的胶原蛋白，获得动物胶原蛋白混合物；

(6)盐析：将动物胶原蛋白混合物pH调节至碱性条件，对动物胶原蛋白混合物进行盐析，获得Ⅲ型胶原蛋白沉淀；

(7)脱盐、浓缩：采用超滤、透析和凝胶色谱方法中的一种或者几种任意组合，对得到的Ⅲ型胶原蛋白溶液进行脱盐和浓缩处理。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中用浓度为5-30％m/v的NaCl溶液浸泡过夜；用纯化水冲洗至无残留后用浓度为0.1-2％v/v的表面活性剂浸泡处理0.5-6h；再次用纯化水冲洗后用浓度为3-10％v/v的过氧化物溶液浸泡处理30-60min。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂包括SDS/TritonX-100、Na₂EDTA、双氯苯双胍己烷、苯扎氯铵/十二烷基二甲基苄基氯化铵、苯扎溴铵中的任一种；所述过氧化物包括过氧化氢、过氧乙酸中的任一种。

9.一种医用级Ⅲ型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法为：将权利要求4-8任一所述方法制备获得的Ⅲ型胶原蛋白在温度不高于25℃下进行辐射灭菌处理，即得。

10.一种根据权利要求9所述的方法制备得到的医用级Ⅲ型胶原蛋白。

11.一种医用级Ⅲ型胶原蛋白，其特征在于，所述医用级Ⅲ型胶原蛋白中包括95％以上的Ⅲ型胶原蛋白，所述医用级Ⅲ型胶原蛋白内毒素低于0.5Eu/mL。

12.如权利要求10或11所述的医用级Ⅲ型胶原蛋白在制备活性护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、医疗器械、保健食品中的应用。