[发明专利]一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法

说明书

本发明提供了一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物，包括dCAPS上游引物和dCAPS下游引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:1‑2所示。还提供了利用该标记引物鉴定番茄柱头颜色的方法，用dCAPS上游引物和dCAPS下游引物对提取的待测样品的基因组DNA进行PCR扩增反应，得到PCR产物，1.5％琼脂糖凝胶电泳检测后，然后利用内切酶BseXI对PCR产物进行酶切，得到酶切产物进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染和显影观察酶切检测结果；酶切检测结果为105bp单一条带，则为黄柱头番茄单株；酶切检测结果为68bp和37bp两条带，则为纯合绿色柱头番茄单株；酶切检测结果为105bp、68bp和37bp三条带，则为杂合绿柱头番茄单株。本发明为番茄外观形态种质资源的遗传评价提供新的依据。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法。

背景技术

番茄是目前世界上栽培和消费最广泛的蔬菜作物，具有明显的杂种优势，柱头颜色一般为绿色。柱头是雌蕊的重要组成部分，接受花粉，对番茄授粉受精和种子、果实发育都有重要的意义。对柱头颜色进行快速筛选，可以大大节约杂交育种过程中的人力和物力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法，该dCAPS标记引物作为番茄育种中优良的标记性状，用于杂交子代的选育，该性状的应用可以大大节约杂交育种过程中的人力和物力。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物，所述dCAPS标记引物包括dCAPS上游引物和dCAPS下游引物，所述dCAPS上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述dCAPS下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供了上述的用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物鉴定番茄柱头颜色的方法，该方法为：

S1、提取待测番茄的基因组DNA；

S2、用dCAPS上游引物和dCAPS下游引物对S1中提取的待测样品的基因组DNA进行PCR扩增反应，得到PCR产物；

所述PCR扩增的体系为：待测番茄样品的基因组DNA 1μL、dCAPS上游引物0.5μL、dCAPS下游引物0.5μL、5μL 2×Taq Master Mix、ddH₂O补足至10μL；

所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55℃退火30s；72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸7min；4℃保存；

S3、取3μL的S2中得到的PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，然后对S2中得到的PCR产物利用BseXI内切酶在温度为65℃的条件下，酶切反应30min，得到酶切产物；

所述酶切反应体系为：PCR产物7μL，10×BseXI buffer 1μL，BseXI酶0.2μL，ddH₂O补足至10μL；

S4、将S3中得到的酶切产物进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，在功率为20W的条件下电泳1.5h，电泳结束后，进行银染和显影观察酶切检测结果；结果判断：

酶切检测结果为105bp单一条带，则为黄柱头番茄单株；

酶切检测结果为68bp和37bp两条带，则为纯合绿色柱头番茄单株；

酶切检测结果为105bp、68bp和37bp三条带，则为杂合绿柱头番茄单株。