[发明专利]一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法

权利要求书

1.一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物，其特征在于，所述dCAPS标记引物包括dCAPS上游引物和dCAPS下游引物，所述dCAPS上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述dCAPS下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种如权利要求1所述的用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物鉴定番茄柱头颜色的方法，其特征在于，该方法为：

S1、提取待测番茄的基因组DNA；

S2、用dCAPS上游引物和dCAPS下游引物对S1中提取的待测样品的基因组DNA进行PCR扩增反应，得到PCR产物；

所述PCR扩增的体系为：待测番茄样品的基因组DNA 1μL、dCAPS上游引物0.5μL、dCAPS下游引物0.5μL、5μL 2×Taq Master Mix、ddH₂O补足至10μL；

所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55℃退火30s；72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸7min；4℃保存；

S3、取3μL的S2中得到的PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，然后对S2中得到的PCR产物利用内切酶BseXI在温度为65℃的条件下，酶切反应30min，得到酶切产物；

所述酶切反应体系为：PCR产物7μL，10×BseXIbuffer 1μL，BseXI酶0.2μL，ddH₂O补足至10μL；

S4、将S3中得到的酶切产物进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，在功率为20W的条件下电泳1.5h，电泳结束后，进行银染和显影观察酶切检测结果；结果判断：

酶切检测结果为105bp单一条带，则为黄柱头番茄单株；

酶切检测结果为68bp和37bp两条带，则为纯合绿色柱头番茄单株；

酶切检测结果为105bp、68bp和37bp三条带，则为杂合绿柱头番茄单株。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S2中所述PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测结果指示的条带中，纯合绿柱头番茄单株PCR结果对应的条带的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示；黄色柱头番茄单株PCR结果对应的条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S4中所述酶切检测结果中37bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；68bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；105bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示。