[发明专利]乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用

说明书

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用。本发明提供的乙嘧酚半抗原，具有式I所示结构，式I中的R₁为能够与载体蛋白直接偶联的活性基团。本发明提供的乙嘧酚半抗原在保留乙嘧酚基本结构的基础上，以乙嘧酚原有的‑CH₂‑CH₂‑CH₂‑CH₂‑结构作为连接臂，在连接臂上远离乙嘧酚的特征结构的位点上引入能够与载体蛋白直接偶联的活性基团R₁，有效避免外接连接臂带来的非特异性结合，引入的活性基团偶联载体蛋白后能够充分暴露乙嘧酚本体分子的特征结构，制备得到的乙嘧酚完全抗原具有免疫原性，制备的抗乙嘧酚抗体特异性好，灵敏度高，其可以用于建立乙嘧酚免疫学检测方法或检测试剂，具有广阔应用前景。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体及制备方法和应用。

背景技术

乙嘧酚英文名称为prometryn，化学名称为：5-丁基-2-乙基氨基-4-羟基-6-甲基嘧啶，CAS登记号为：23947-60-6，分子式为：C₁₁H₁₉N₃O，分子量为：209.3，中文别名为：乙嘧醇、不霉定、乙氨哒酮、胺嘧啶、5-丁基-2-乙氨基-4-羟基-6-甲基嘧啶、乙菌定或乙嘧酚。

乙嘧酚对草莓、西瓜、黄瓜、葡萄等许多作物白粉病的实际防效、对作物的安全性高于其他进口或国产同类产品。但不合理的乙嘧酚施药方式与施药剂量会造成环境污染与农药残留问题，残留的乙嘧酚可以通过富集作用在食物链中不断传递、迁移，从而对农产品的质量与安全、生态环境造成不良的影响，进而危害人类健康。因此，需对乙嘧酚的残留水平进行监测。

目前已经建立了许多检测环境样品、食品和农产品中乙嘧酚残留的方法。仪器分析方法具有足够的准确性和高度的敏感性，如液相色谱法(LC)、LC-串联质谱法(LC-MS/MS)、气相色谱法(GC)和GC-串联质谱法(GC-MS/MS)均是常用的检测方法。然而，这些仪器分析方法通常需要训练有素的人员、昂贵的仪器、复杂的样品预处理和耗时的分析过程，不适合用于现场对乙嘧酚的残留检测。

免疫分析方法由于其对抗原和抗体的特异性识别作用，具有快速、简便、实时、易于进行现场检测、样品前处理简单、灵敏度高、选择性强、适合于高通量分析等优点，而且能大幅度降低检测成本。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种乙嘧酚半抗原、完全抗原、抗体制备方法及应用，本发明提供的乙嘧酚半抗原偶联后能够充分突出乙嘧酚抗原决定簇，制备得到的乙嘧酚完全抗原具有免疫原性，可特异性识别乙嘧酚，从而得到的抗乙嘧酚抗体特异性好，灵敏度高，进而可以用于乙嘧酚的免疫分析方法的研发。

本发明提供了一种乙嘧酚半抗原，具有式I所示结构：

所述式I中的R₁为能够与载体蛋白直接偶联的活性基团。

优选的，所述R₁包括-(CH₂)_n-COOH、-(CH₂)_n-NH₂、-(CH₂)_n-OH、-(CH₂)_n-COOR₂、n为0～3的整数，m为0～4的整数，所述-(CH₂)_n-COOR₂中的R₂包括

优选的，所述乙嘧酚半抗原具有式I-1或式I-2所示结构：

本发明提供了上述技术方案所述的乙嘧酚半抗原的制备方法，包括以下步骤：