[发明专利]敲除JAMs基因提高番茄对南方根结线虫抗性在审
| 申请号： | 202210864977.2 | 申请日： | 2022-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN115976099A | 公开（公告）日： | 2023-04-18 |
| 发明（设计）人： | 周杰;邹金萍;喻景权 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 高佳逸 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | jams 基因 提高 番茄 南方 线虫 抗性 | ||
1.一种通过敲除JAMs基因提高番茄对南方根结线虫抗性的方法，其特征在于，所述JAMs基因为JAM1基因和/或JAM2基因；
所述JAM1基因选自以下两种中任意一种：
A、所述JAM1基因的碱基序列如SEQ ID NO：1所示；
B、任一其碱基序列与SEQ ID NO：1所示序列有90％以上同源性且编码如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的DNA分子；
所述JAM2基因选自以下两种中任意一种：
a、所述JAM2基因的碱基序列如SEQ ID NO：3所示；
b、任一其碱基序列与SEQ ID NO：3所示序列有90％以上同源性且编码如SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的DNA分子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括步骤：
(1)构建含所述JAMs基因CRISPR/Cas9载体的根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)工程菌；
(2)将所述根癌农杆菌工程菌介导转化目标番茄外植体，制备得到JAMs基因敲除的jams突变体植株。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述番茄外植体为番茄子叶。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，将所述JAMs基因敲除的jams突变体植株进行正常生长管理，获得稳定遗传的转基因F2代及以后种子。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将所述JAMs基因敲除的jams突变体植株接种南方根结线虫，记录植株根结数目和表型。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，接种南方根结线虫胁迫处理具体为：当所述JAMs基因敲除的jams突变体植株长至五叶一心时，接种南方根结线虫。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，接种的南方根结线虫为处于J2期、具有侵染活力的南方根结线虫。
8.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，接种南方根结线虫处理的时间为4周。
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