[发明专利]一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述12个基因座分别为：gpz-054、GPL-047、gpz-020、SRY、gpz-006、GPL-031、GPL-029、GPL-053、gpz-051、ZF、gpz-047和GPL-060；

所述的12个基因座对应的引物序列为：

gpz-054如SEQ ID NO：1和2所示；

GPL-047如SEQ ID NO：3和4所示；

gpz-020如SEQ ID NO：5和6所示；

SRY如SEQ ID NO：7和8所示；

gpz-006如SEQ ID NO：9和10所示；

GPL-031如SEQ ID NO：11和12所示；

GPL-029如SEQ ID NO：13和14所示；

GPL-053如SEQ ID NO：15和16所示；

gpz-051如SEQ ID NO：17和18所示；

ZF如SEQ ID NO：19和20所示；

gpz-047如SEQ ID NO：21和22所示；

GPL-060如SEQ ID NO：23和24所示。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，每个基因座对应的引物中至少有1条的5'端通过荧光染料标记物进行标记。

3.根据权利要求2所述的一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述12个基因座分为4组；第一组：gpz-054、GPL-047、gpz-020，对应引物的标记荧光染料标记物为FAM；第二组：SRY、gpz-006、GPL-031，对应引物的标记荧光染料标记物为HEX；第三组：GPL-029、GPL-053、gpz-051，对应引物的标记荧光染料标记物为L-552；第四组：ZF、gpz-047、GPL-060，对应引物的标记荧光染料标记物为LR600。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR扩增试剂；所述PCR扩增试剂包括去离子水和反应缓冲液。

5.根据权利要求4所述的一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液中包括：热启动Taq酶2U、KCl 30mM、Tris-HClbuffer 50mM、MgCl₂3.0mM、BSA 0.5mg/ml和dNTPs 0.4mM；

所述Tris-HClbuffer的pH为8.2～8.4。

6.权利要求1～5任意一项所述试剂盒的使用方法，其特征在于，以大熊猫基因组DNA为模板，利用所述试剂盒进行PCR扩增。

7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述试剂盒在进行PCR扩增时的扩增体系，以25.0μL计，包括以下组分：去离子水14.0μL；反应缓冲液7.5μL；引物混合液2.5μL；模板DNA 1.0μL；所述模板DNA的浓度为0.1～0.3ng/μL。

8.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，所述试剂盒在进行PCR扩增时的扩增程序包括以下步骤：95℃保温1min；94℃保温30s，59℃保温35s，运行30个循环；4℃保温。

9.权利要求1所述的一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒在大熊猫个体识别中的应用。

10.权利要求1所述的一种同时检测大熊猫12个基因座的复合扩增试剂盒在大熊猫性别鉴定或亲子鉴定中的应用。