[发明专利]一种小鼠颈动脉血管组织单细胞悬液的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种小鼠颈动脉血管组织单细胞悬液的制备方法，其特征在于，包含如下过程：

S1：小鼠麻醉后使用预冷的PBS进行心脏灌流，剔除颈动脉周围组织；

S2：将颈动脉纵向剖开，放入含1.5％FBS的六孔板中；

S3：用手术剪刀将每根颈动脉血管剪成约为2mm²的4段，吸入1.5mL EP管中，2000rpm离心5分钟以沉淀血管组织；

S4：用HBSS溶液配制1mL组织解离RA工作液；

S5：每管加入500μL解离工作液，放入37℃水浴锅中加热解离1小时；

S6：每间隔10分钟使用1mL移液枪吹打一次；

S7：1小时后加入500μL 5％FBS混匀，使用40μm滤器进行过滤；

S8：放入离心机中，1000rpm离心5分钟；

S9：吸弃上清后加入200μL组织解离RB工作液；

S10：放入37℃水浴锅消化5分钟，期间每隔1分钟轻轻吹打一次；

S11：使用200μL 5％FBS终止消化，1000rpm离心5分钟；

S12：吸弃上清，用100μL PBS重悬；

S13：使用细胞计数仪检测细胞悬液中细胞浓度和活率。

2.根据权利1所述的一种小鼠颈动脉血管组织单细胞悬液的制备方法，其特征在于：步骤S4所述的组织解离RA工作液包含1mg/mLⅡ型胶原酶和0.02mg/mL DNA酶。

3.根据权利1所述的一种小鼠颈动脉血管组织单细胞悬液的制备方法，其特征在于：步骤S9所述的组织解离RB工作液中，HBSS和0.25％无EDTA胰酶的比例配置为1:1。

4.根据权利1-3任一项所述的制备方法在单细胞测序和流式检测相关领域中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，使用10×Genomics平台Chromium SingleCell 3′Reagent Kits v3试剂对单细胞悬液进行单细胞转录组测序，对原始测序数据使用CellRanger软件进行基因匹配分析，获得高品质的单细胞测序数据。