[发明专利]一种双靶点融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物医药领域，提供了一种双靶点融合蛋白以及其制备方法和应用，所述双靶点融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。本发明的融合蛋白具有更长效、更稳定及更佳的治疗效果，且副作用小。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及针对双靶点的融合蛋白。

背景技术

成纤维细胞生长因子21(FGF21)是FGF家族成员之一，是一种特异性作用于肝脏、脂肪和胰岛组织的新型代谢调控因子，其在糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化和脂肪肝等多种代谢疾病的临床应用方面极具潜力。

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是回肠内分泌细胞生成的一种脑肠肽，由胰高血糖素原基因表达具有多种生物学特性及功能，如降脂、降压、对心血管系统产生保护作用。

FGF21和GLP-1通过不同的靶细胞上的相应受体或相同靶细胞上的不同受体而发挥调节血糖血脂的作用。若二者的功能可以有效结合并产生协同效应，既能控制血糖，又能分解脂肪和降低体重，对于糖尿病和肥胖等代谢疾病的治疗，协同功效将比单一的FGF21或GLP-1类似物具有明显的优势。虽然已存在多种针对该双靶点的融合蛋白，但本领域仍需要具有更优异性能的双靶点融合蛋白。

发明内容

基于此，为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供了一种长效的双靶点融合蛋白，是将GLP-1和人FGF21突变体通过类弹性蛋白(ELP)连接而成。

第一个方面，本发明提供一种双靶点融合蛋白GEF，具有G-L-E-L-F结构，其中，G表示GLP-1结构，E表示类弹性蛋白ELP，F表示FGF21，L为连接肽，由(GGGGS)n氨基酸序列组成，n可以是0-5之间的整数。

在优选的实施方式中，所述GLP-1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述ELP的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或3所示，所述FGF21的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在一种具体实施方式中，所述双靶点融合蛋白GEF的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。

在第二个方面，提供一种生物材料，为

1)核酸分子，编码本发明的双靶点融合蛋白GEF；优选地，所述核酸分子的序列如SEQ ID NO:12所示；

2)载体，包含1)所述的核酸分子；

3)宿主细胞，包含1)所述的核酸分子或2)所述的载体，且能够表达双靶点融合蛋白GEF。

在第三个方面，提供一种组合物，包括本发明的双靶点融合蛋白GEF和药学上可接受的载体，如赋形剂或稀释剂。优选地，所述组合物治疗糖尿病、肥胖及非酒精性脂肪肝等代谢类疾病及肝炎或相关疾病。

在第四个方面，提供本发明的GEF蛋白或生物材料或组合物在制备治疗糖尿病、肥胖、肝炎或肝炎相关疾病中的一种或多种疾病、或改善血糖、肝功或血脂的药物中的应用。

在本发明的优选实施方式中，所述疾病为糖尿病、肥胖症、胰岛素抵抗、高血脂、肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝癌、原发性胆汁性胆管炎和/或原发性硬化性胆管炎等。

在第五个方面，提供本发明GEF蛋白的制备方法，为：

1)化学方法，根据GEF蛋白的氨基酸序列进行化学合成；

2)生物方法，包括培养本发明所述的宿主细胞，使其表达GEF蛋白，并进一步纯化GEF蛋白。

化学方法和生物方法均为本领域常规技术。