[发明专利]一种粪便肠癌多靶点甲基化基因检测试剂及方法

说明书

本发明涉及一种粪便肠癌多靶点甲基化基因检测技术及方法。具体地，本发明提供检测DNA甲基化的试剂，所述试剂包含检测对象样品中的DNA序列或其中一个或多个CpG二核苷酸甲基化水平的试剂，所述DNA序列包括以下基因序列：NDRG4、BMP3、SDC2、TFPI2、VIM和ITGA4中的一种或多种。本方法利用检测粪便肠癌相关基因甲基化水平，实现更高准确率更低成本的肠癌无创筛查目的。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种粪便肠癌多靶点甲基化基因检测技术及方法。

背景技术

结直肠癌(CRC，大肠癌)是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，对男性和女性均有影响。随着人们生活习惯的改变，其发病率和死亡率明显上升。由于大部分患者在早期未能及时发现并得到治疗，肠癌死亡率居高不下。

肠癌是高发癌症中最适合筛查的癌症之一。肠癌发生缓慢，需要十年及以上的时间，通常是从结肠或直肠小的非癌性息肉开始的，如果通过筛查，肠癌可以早期被发现。早发现早治疗最有可能成功，因此肠癌又是最容易治愈的癌症之一。早期肠癌患者手术5年生存率达90％以上，而中晚期患者5年生存率仅10％左右。在美国，通过肠癌早期筛查，肠癌发病率降低了近40％，死亡率下降了51％。因此，早筛，早诊，早治疗对肠癌显得尤为重要。

目前，传统的肠癌检测方法有多种，但均存在不足。其中，粪便隐血检测(FOBT/FIT)常用于临床，检测简便，成本低，受检者可自行取样，但是灵敏度和特异性较低；CT检查对早期以及小直径病灶检出率有限，且存在辐射；肠镜检查是肠癌诊断的金标准，但是侵入性，患者依从性低，有肠穿孔和麻醉风险。

粪便DNA检测作为一种新兴的肠癌无创筛查，其灵敏性和特异性均优于粪便隐血检测，是一种无创、无痛，用户依从性好的筛查方式。但是国内市场上肠癌筛查产品的检测基因比较单一，所以本领域仍需一种灵敏度更高的检测方法。

发明内容

本发明提供了一种对样品中多个基因甲基化水平进行检测，利用检测粪便肠癌相关基因甲基化水平，实现更高准确率更低成本的肠癌无创筛查目的。

本发明第一方面提供检测DNA甲基化的试剂，所述试剂包含检测对象样品中的DNA序列或其片段或其中一个或多个CpG二核苷酸甲基化水平的试剂，所述DNA序列包括以下基因序列中的一种或多种或全部：NDRG4、BMP3、SDC2、TFPI2、VIM和ITGA4。

在一个或多个实施方案中，所述DNA序列至少包含TFPI2和ITGA4；进一步地，所述DNA序列还包含SDC2和VIM中的一个或两个；更进一步地，所述DNA序列还包含：NDRG4和BMP3中的一个或两个，例如NDRG4和任选的BMP3。

在一个或多个实施方案中，所述DNA序列包含TFPI2和ITGA4。进一步地，所述DNA序列还包含以下任一组：(1)SDC2，(2)NDRG4、BMP3、SDC2，(3)NDRG4、SDC2、VIM，(4)NDRG4、SDC2，(5)VIM，(6)NDRG4、BMP3、SDC2、VIM。

在一个或多个实施方案中，所述试剂用于检测肠癌或肠癌前病变。

在一个或多个实施方案中，所述DNA序列包含至少3个CpG二核苷酸。

在一个或多个实施方案中，所述的片段长度为1-1000bp，优选1-700bp。

在一个或多个实施方案中，所述片段是基因序列的启动子区域。

在一个或多个实施方案中，所述片段包含至少1个，优选至少3个CpG二核苷酸。

在一个或多个实施方案中，所述试剂是与所述DNA序列或其片段或它们经转化的序列杂交的引物分子。所述引物分子能扩增出所述DNA序列或其片段或它们经转化的变体。在一个或多个实施方案中，所述引物序列为甲基化特异的。所述引物分子至少9bp。