[发明专利]一种粪便肠癌多靶点甲基化基因检测试剂及方法

权利要求书

1.诊断肠癌或肠癌前病变、筛查肠癌形成或形成的风险或评估肠癌进展或预后的试剂，所述试剂包含检测对象样品中的DNA序列或其片段或其中一个或多个CpG二核苷酸甲基化水平的试剂，所述DNA序列包括以下基因序列中的一种或多种或全部：NDRG4、BMP3、SDC2、TFPI2、VIM和ITGA4。

2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述DNA序列至少包含TFPI2和ITGA4；

优选地，所述DNA序列还包含SDC2和VIM中的一个或两个；

更优选地，所述DNA序列还包含：NDRG4和BMP3中的一个或两个；

进一步优选地，所述DNA序列包含TFPI2、ITGA4和以下任一组：(1)SDC2，(2)NDRG4、BMP3、SDC2，(3)NDRG4、SDC2、VIM，(4)NDRG4、SDC2，(5)VIM，(6)NDRG4、BMP3、SDC2、VIM。

3.如权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，

所述片段是基因序列的启动子区域，和/或

所述片段包含至少1个CpG二核苷酸，和/或

所述试剂是与所述DNA序列或其片段或它们经转化的序列杂交的引物分子，和/或

所述试剂是与所述DNA序列或其片段或它们经转化的序列杂交的检测探针，

优选地，

所述引物具有选自以下任一组或多组或全部的序列：(1)SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9，(2)SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11，(3)SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13，(4)SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15，(5)SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17，(6)SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19，

所述检测探针具有SEQ ID NO:22-27中任一项或多项或全部所示的序列，

所述对象是哺乳动物；优选地，所述样品来自哺乳动物的粪便。

4.物质在制备用于诊断对象肠癌或肠癌前病变或筛查肠癌高危人群的试剂盒中的用途，所述物质包含：

(a)用于确定对象样品中的DNA序列或其片段或其中一个或多个CpG二核苷酸甲基化水平的试剂或装置，和

任选的(b)所述DNA序列或其片段经处理的核酸分子，所述处理使未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，

任选的(c)用于捕获所述DNA序列或其片段的捕获试剂，

任选的(d)处理DNA的转化试剂，其中所述转化试剂能够区分所述DNA中的未甲基化位点和甲基化位点，例如将能够未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，

其中，所述DNA序列包括以下基因序列：NDRG4、BMP3、SDC2、TFPI2、VIM和ITGA4中的一种或多种。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，

所述片段是基因序列的启动子区域，和/或

所述片段包含至少1个CpG二核苷酸，和/或

所述(a)包含权利要求3所述的试剂，和/或

(c)所述捕获试剂是相应基因的特异性捕获试剂；优选地，捕获试剂包含SEQ ID NO:1-6中任一项或多项所示的捕获探针，和/或

(d)所述转化试剂包含亚硫酸氢盐试剂；优选地，所述转化试剂包含：亚硫酸氢铵、亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、亚硫酸氢钙、亚硫酸氢镁、亚硫酸氢铝、亚硫酸氢根离子，及其任意组合。

6.如权利要求4或5所述的用途，其特征在于，

所述对象是哺乳动物，和/或

所述样品是粪便样品，和/或

所述试剂盒还包括PCR反应试剂，和/或

所述试剂盒还包括检测DNA甲基化的其他试剂，所述其他试剂是选自以下方法中的一个或多个所用的试剂：基于重亚硫酸盐转化的PCR、DNA测序、甲基化敏感的限制性内切酶分析法、荧光定量法、甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法、基于芯片的甲基化图谱分析、质谱，和/或

所述试剂盒还包括粪便处理试剂，所述粪便处理试剂包括粪便样品裂解液，所述裂解液含有乙二胺四乙酸(EDTA)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、氯化钠(NaCl)以及抗生素。