[发明专利]一种定量检测KRAS基因突变的引物探针组合及其应用

权利要求书

1.一种定量检测KRAS基因突变的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括定量检测KRAS基因突变的引物和探针；

所述探针包括KRAS基因的野生型探针、KRAS基因的G12D突变位点、G12S突变位点和G13D突变位点的突变探针；

所述KRAS基因的上游引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列，下游引物的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列；

所述KRAS基因的野生型探针的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列；

所述KRAS基因的G12D突变位点的突变探针的核酸序列包括SEQ ID NO.4所示的序列；

所述KRAS基因的G12S突变位点的突变探针的核酸序列包括SEQ ID NO.5所示的序列；

所述KRAS基因的G13D突变位点的突变探针的核酸序列包括SEQ ID NO.6所示的序列。

2.根据权利要求1所述的定量检测KRAS基因突变的引物探针组合，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；

优选地，所述荧光基团包括FAM、VIC、TET、JOE、HEX、TAMRA、ROX、CY5或Texas Red；

优选地，所述淬灭基团包括MGB、TAMRA、DABCYL、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Eclipse。

3.权利要求1或2所述的定量检测KRAS基因突变的引物探针组合在制备检测KRAS基因突变的产品中的应用。

4.一种定量检测KRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的定量检测KRAS基因突变的引物探针组合。

5.根据权利要求4所述的定量检测KRAS基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应液；

优选地，所述PCR反应液包括DNA聚合酶、Mg²⁺、dNTPs和水。

6.一种以非疾病诊断和/或治疗为目的的定量检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括：

以待测样本中的基因组为模板，利用权利要求1或2所述的定量检测KRAS基因突变的引物探针组合进行数字PCR，进行荧光信号检测，根据数字PCR结果进行结果判读。

7.根据权利要求6所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的定量检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，所述数字PCR的反应条件为：

93～98℃预变性8～12min；

93～96℃、25～35sec，55～65℃、25～35sec，共45～55个循环。

8.根据权利要求6所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的定量检测KRAS基因突变的方法，其特征在于，所述结果判读包括对数字PCR反应液滴进行计数及量化荧光信号，计算靶标突变丰度。

9.一种定量检测KRAS基因突变的装置，其特征在于，所述装置包括检测单元和分析单元；

所述检测单元用于执行包括：

以待测样本中的基因组为模板，利用权利要求1或2所述的定量检测KRAS基因突变的引物探针组合进行数字PCR，进行荧光信号检测；

所述分析单元用于执行包括：

根据数字PCR结果进行结果判读。

10.根据权利要求9所述的定量检测KRAS基因突变的装置，其特征在于，所述数字PCR的反应条件为：

93～98℃预变性8～12min；

93～96℃、25～35sec，55～65℃、25～35sec，共45～55个循环；

优选地，所述结果判读包括对数字PCR反应液滴进行计数及量化荧光信号，计算靶标突变丰度。