[发明专利]检测高血压精准用药相关基因的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测高血压精准用药相关基因的试剂盒，包括反应液Ⅰ、反应液Ⅱ、反应液Ⅲ、反应液Ⅳ和反应液Ⅴ；所述反应液Ⅰ为PCR反应所必须的试剂；所述反应液Ⅱ、反应液Ⅲ、反应液Ⅳ和反应液Ⅴ中包括检测CYP2D6基因、ADRB1基因、NPPA基因、CYP3A5基因ACE基因、CYP2C9基因和AGTR1基因的野生型正向引物、突变型正向引物、野生突变型共用反向引物和共用荧光探针。本发明还公开了利用该试剂盒的检测高血压精准用药相关基因的方法。本发明的检测高血压精准用药相关基因的试剂盒仅需4管PCR反应就可以准确检测单个样本7个位点的21种基因型，简洁高效，灵敏度高，能有效指导抗高血压药物相关基因的临床应用。

技术领域

本发明涉及一种检测高血压精准用药相关基因的试剂盒，属于基因检测技术领域。

背景技术

高血压是目前世界第一大威胁生命的疾病，发病率高达23.2％，危害性高于癌症和糖尿病，超出心肾等并发症死亡率。通过药物治疗控制血压以减少高血压并发症是治疗高血压的主要手段，治疗高血压的药物主要有β受体阻断药、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、利尿剂、钙拮抗剂(CCB)等5类。但是由于代谢酶基因多态性等原因，治疗高血压的药物在不同患者身上体现出明显的个体反应差异，因此需要通过基因检测判断药物代谢酶及药靶受体的基因型，以实现抗高血压药物的个性化给药。目前，NMPA只批准了1家公司的含CYP2D6靶点的高血压指导用药基因分型试剂盒，但此产品仅检测5个靶点，不能涵盖全部5种药理降压药的用药指导。本发明拟构建4管multiplex qPCR体系，基因分型ADRB1、AGTR1、CYP2C9、CYP2D6、ACE、CYP3A5、NPPA等7个靶点。通过4管反应液即可准确检测7个抗高血压药物相关基因的21种基因型。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种检测高血压精准用药相关基因的试剂盒。本发明的检测试剂盒，仅需4管PCR反应即可准确检测7个抗高血压药物相关基因(ADRB1、AGTR1、CYP2C9、CYP2D6、ACE、CYP3A5、NPPA)的21种基因型，灵敏度高，特异性强，可配合自动化仪器检测，操作简便。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种检测高血压精准用药相关基因的试剂盒，包括反应液Ⅰ、反应液Ⅱ、反应液Ⅲ、反应液Ⅳ和反应液Ⅴ；

所述反应液Ⅰ为PCR反应所必须的试剂，包括：AceTaq DNA聚合酶、Heat-labileUDG、Specific ROX Reference、dNTP/dUTP mix和Mg²⁺；

所述反应液Ⅱ包括检测CYP2D6基因、ADRB1基因、NPPA基因和CYP3A5基因的野生型正向引物、野生突变型共用反向引物和共用荧光探针；

所述反应液Ⅲ包括检测CYP2D6基因、ADRB1基因、NPPA基因和CYP3A5基因的突变型正向引物、野生突变型共用反向引物和荧光探针；

所述反应液Ⅳ包括检测ACE基因、CYP2C9基因和AGTR1基因的野生型正向引物、野生突变型共用反向引物和共用荧光探针；

所述反应液Ⅴ包括检测ACE基因、CYP2C9基因和AGTR1基因的突变型正向引物、野生突变型共用反向引物和共用荧光探针。

所述反应液Ⅱ中的引物、探针的核苷酸序列如下所示(方向：5’-3’)(F表示正向引物，R表示反向引物，P表示Taqman检测探针)，4条探针上连接不同的荧光标记：

(1)CYP2D6-WF：GCTGGGCTGCACGCTAAC；如SEQ ID NO.1所示；

(2)CYP2D6-R：CCTCCCTCACCTGGTCGAA；如SEQ ID NO.2所示；