[发明专利]内化菌介导的抗菌药物耐受性评估方法及其应用

说明书

本公开提供了一种内化菌介导的抗菌药物耐受性评估方法及其应用。该方法基于内化菌的在细胞内外的最小杀菌浓度的比值，以及内化菌在抗菌药物作用前后感染细胞的百分比值，获得药物耐受性Tr值，根据Tr值对内化菌介导的抗菌药物耐受性进行评估。该方法可以用于比较不同抗菌药物对同一内化菌的耐受程度，同时可以用于比较同一抗菌药物对不同内化菌的耐受程度，此外还可以比较同一内化菌在不同的感染宿主细胞中形成抗菌药物耐受性的情况。该方法可以可视化和数据化的呈现内化菌对抗菌药物产生的耐受性，同时也可以指导临床合理用药。

技术领域

本公开涉及内化菌介导的抗菌药物耐受性评估方法，具体涉及一种可以评估内化菌对抗菌药物耐受程度的耐受值数学评估方法。

背景技术

动物源细菌耐药性问题威胁畜禽健康，严重影响全球经济发展。不断上升的耐药率和新抗菌药物的缺乏致使兽医临床抗耐药菌工作困难重重。解决耐药性问题需要从临床源头寻求突破，可以在宿主细胞内生存的内化菌介导的耐受性更容易出现，是耐药性的潜伏期，促进耐药病原菌的传播感染。临床中相比耐药性，受宿主因素直接调控且不依赖遗传基因突变的细菌耐受性更易出现，耐受性是耐药性的“潜伏期”，促进耐药性发展，加重病原菌传播感染。内化菌介导的耐受性是指由一类内化进入宿主细胞的细菌耐受高浓度抗菌药物的现象。许多病原菌包括金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等常见致病菌都具备内化能力，可以通过内化在细胞内存活并劫持细胞防御功能对抗菌药物耐受。然而内化菌对不同抗菌药物介导的耐受性的耐受程度不一，同一抗菌药物对不同内化菌的敏感和耐受情况也不同，此外内化菌侵染的不同宿主细胞也决定了抗菌药物是否对该种抗菌药物产生耐受性。

综上，亟需一种简单的直观的，并且能将宿主细胞，内化菌，抗菌药物三者都涵盖在内的评估方法来准确比较内化菌介导的抗菌药物耐受性。

发明内容

(一)要解决的技术问题

针对上述问题，本公开提供了一种内化菌介导的抗菌药物耐受性评估方法及其应用，以至少部分解决以上所提出的技术问题。

(二)技术方案

本公开一方面提供了一种内化菌介导的抗菌药物耐受性评估方法，包括：

基于内化菌在细胞内的最小杀菌浓度MBC_IN和内化菌在细胞外的最小杀菌浓度MBC_EX的比值，获得ΔMBC；即ΔMBC＝MBC_IN/MBC_EX；

基于内化菌感染细胞的百分比N和抗菌药物作用后感染细胞的百分比N_D的比值，获得ΔN；即ΔN＝N/N_D；

获得药物耐受性Tr值，其中Tr＝ΔMBC×ΔN；

根据药物耐受性Tr值对内化菌介导的抗菌药物耐受性进行评估。

根据本公开的实施例，当Tr≤1时，表明内化菌对抗菌药物敏感并且不产生耐受性；当Tr＞1时，表明内化菌对抗菌药物产生耐受性。

根据本公开的实施例，当Tr＞1时，Tr值越大，表明对抗菌药物的耐受性越高。

根据本公开的实施例，所述内化菌在细胞外的最小杀菌浓度MBC_EX可采用现有常规方法测定，例如菌落计数法。

根据本公开的实施例，所述内化菌在细胞内的最小杀菌浓度MBC_IN的检测方法包括：建立内化菌与宿主细胞互作感染模型，加入不同浓度的待检测抗菌药物后，使宿主细胞裂解以释放出宿主细胞内的内化菌。具体实例中，可进一步将释放出的内化菌涂于细菌培养皿上，培养后(例如培养16小时)，检测(或观察)内化菌生长情况；未生长内化菌的培养皿对应的抗菌药物浓度即为内化菌在细胞内的MBC_IN。