[发明专利]鉴定小菜蛾谷氨酸门控氯离子通道基因突变的方法及引物

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴定小菜蛾谷氨酸门控氯离子通道基因突变的方法及引物。本发明提供与阿维菌素类杀虫剂抗性相关的蛋白突变体，所述蛋白突变体在谷氨酸门控氯离子通道蛋白的基础上，第263位的缬氨酸突变为异亮氨酸。本发明可鉴定昆虫对阿维菌素类杀虫剂的抗性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及鉴定小菜蛾谷氨酸门控氯离子通道基因突变的方法及引物。

背景技术

阿维菌素(Avermectin,AVMs)是由链霉菌中灰色链霉菌Streptomycesavermitilis发酵产生的具有杀螨、杀线虫和杀虫活性的十六元大环内酯化合物，以胃毒作用为主，兼具触杀作用。阿维菌素类杀虫剂会引起昆虫共济失调和麻痹，对防治小菜蛾具有显著的效果，目前已成为蔬菜生产上防治小菜蛾的主导药剂之一。

小菜蛾(Diamondback moth，Plutella xylostella)属鳞翅目菜蛾科，是一种分布广泛的世界性害虫，主要为害甘蓝、萝卜、白菜等十字花科类植物，具有生长周期短、世代重叠严重、繁殖能力强等特点，并且具有远距离迁飞能力，在气候条件较为适宜的情况下极易暴发成灾。

目前对小菜蛾的防治以化学手段为主。由于化学药剂长期、大量、不合理的使用，小菜蛾对有机磷、有机氯、氨基甲酸盐、拟除虫菊酯、苏云金芽孢杆菌等几乎所有种类的杀虫剂都产生了抗药性。其中部分田间小菜蛾对阿维菌素的抗性发展快速。

谷氨酸门控氯离子通道(Glucls)是阿维菌素类杀虫剂的重要作用靶标。Glucls最早在蝗虫肌肉中发现，在蝗虫的吞咽、运动以及感知中发挥着重要作用。阿维菌素类杀虫剂作用于Glucls，可激活氯离子通道，引起向内的氯离子流，使神经膜超极化，抑制兴奋性动作电位的产生，最终引起昆虫死亡。靶标突变是造成小菜蛾对阿维菌素产生抗性的重要原因之一。曾有报道小菜蛾Glucls第309位丙氨酸Ala突变为缬氨酸Val(A309V)与其对阿维菌素的抗性相关。

现有技术中，鉴定小菜蛾谷氨酸门控氯离子通道基因突变的方法非常少，缺少一种可以用于检测田间小菜蛾对阿维菌素抗性的新型分子标记。

发明内容

本发明提供鉴定小菜蛾谷氨酸门控氯离子通道基因突变的方法及引物，用以解决现有技术中缺少一种可以用于检测田间小菜蛾对阿维菌素抗性的新型分子标记的缺陷，实现田间小菜蛾对阿维菌素抗性的检测。

本发明提供与阿维菌素类杀虫剂抗性相关的蛋白突变体，所述蛋白突变体在谷氨酸门控氯离子通道蛋白的基础上，第263位的缬氨酸突变为异亮氨酸。

本发明还提供编码上述的蛋白突变体的核酸。

根据本发明所述的核酸，其核苷酸序列为如下任一种DNA分子：

1).如SEQ ID NO.5所示序列；

2).与1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；

3)与1)或2)中的DNA序列具有90％以上同源性且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子。

本发明还提供一种谷氨酸门控氯离子通道基因，其核苷酸序列为如下任一种DNA分子：

1).如SEQ ID NO.3所示序列；

2).与1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；

3).与1)或2)中的DNA序列具有90％以上同源性且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子。该序列为未突变前的小菜蛾谷氨酸门控氯离子通道基因突变点附近的基因片段。所述SEQ ID NO.3与SEQ ID NO.5的区别为第145位碱基不同，SEQ ID NO.3中为G，SEQ IDNO.5中为A。

以上均与阿维菌素类杀虫剂抗性相关。