[发明专利]用于检测I型和II型非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR引物探针组、方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测I型和II型非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR引物探针组，其特征在于，所述荧光PCR引物探针组由如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的引物对，如SEQ ID No:3所示的第一特异性探针，以及如SEQ ID No:4所示的第二特异性探针组成。

2.根据权利要求1所述的多重荧光PCR引物探针组，其特征在于，所述第一特异性探针和所述第二特异性探针的5’端各自标记有荧光报告基团；所述第一特异性探针和所述第二特异性探针的3’端各自标记有小沟结合物和非荧光猝灭基团；且，所述荧光报告基团选自VIC或FAM。

3.一种用于检测I型和II型非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述多重荧光PCR试剂盒包括如权利要求1或2所述的多重荧光PCR引物探针组和DNA酶混合液。

4.根据权利要求3所述的多重荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述DNA酶混合液包括酶稀释液、热启动Taq酶和脱氧核糖核苷酸。

5.根据权利要求4所述的多重荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述脱氧核糖核苷酸为dATP、dUTP、dGTP以及dCTP。

6.根据权利要求3-5中任意一项所述的多重荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述引物对、所述第一特异性探针和所述第二特异性探针的浓度各自为0.1-1.5μmol/L。

7.一种用于I型和II型非洲猪瘟病毒的非疾病诊断检测方法，其特征在于，采用根据权利要求3-6中任意一项所述的多重荧光PCR试剂盒。

8.根据权利要求7所述的非疾病诊断检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

S100、提取待测样品的DNA；

S200、采用多重荧光PCR试剂盒对步骤S100中提取的DNA进行荧光扩增；

S300、根据荧光扩增结果判定待测样品中是否含有I型和/或II型非洲猪瘟病毒。

9.根据权利要求8所述的非疾病诊断检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：制备阳性对照质粒；将制备的阳性对照质粒按梯度进行稀释后，获得标准样品；对获得的标准样品分别进行荧光扩增后测定Ct值，构建形成浓度-Ct标准曲线。

10.根据权利要求9所述的非疾病诊断检测方法，其特征在于，所述步骤S300中还包括检测待测样品的Ct值，并根据浓度-Ct标准曲线，定量检测待测样品的浓度。