[发明专利]细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法

权利要求书

1.一种细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将固定于基底膜基质(Matrigel)中的患者来源肺类器官(PDLO)消化下来，添加培养基制备成患者来源肺类器官(PDLO)悬液并计数；

S2.悬浮培养所述患者来源肺类器官(PDLO)悬液，以修复消化下来的所述患者来源肺类器官(PDLO)；

S3.将单克隆菌落培养制备为定量细菌悬液；

S4.将所述定量细菌悬液加入所述患者来源肺类器官(PDLO)悬液中，建立细菌感染肺类器官模型；以及

S5.提取原代外周血单个核细胞(PBMC)计数后加入所述细菌感染肺类器官模型中，以构建所述细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系。

2.根据权利要求1的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，在步骤S1中，用II型胶原酶将固定于所述基底膜基质(Matrigel)中的患者来源肺类器官(PDLO)消化下来。

3.根据权利要求2的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，用浓度为2mg/mL的II型胶原酶将固定于所述基底膜基质(Matrigel)中的患者来源肺类器官(PDLO)在37℃消化10min，用杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)清洗以洗净所述II型胶原酶。

4.根据权利要求1的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，在步骤S2中，悬浮培养所述患者来源肺类器官(PDLO)悬液一周。

5.根据权利要求1的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，在步骤S2中，使用流式管或低吸附孔板进行悬浮培养。

6.根据权利要求1的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，在步骤S3中，将细菌于MHA琼脂板中培养传代至对数生长期后，挑取单克隆菌落至MHB肉汤培养基中，随后使用麦氏比浊仪对细菌悬液进行定量。

7.根据权利要求6的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，在步骤S3中，将挑取的所述单克隆菌落在所述MHB肉汤培养基中在37℃振荡培养16h，随后使用麦氏比浊仪对细菌悬液进行定量，根据需要的感染复数(MOI)比浊至1.5×10^7CFU/mL特定浓度的细菌悬液。

8.根据权利要求1的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，在步骤S5中，提取原代外周血单个核细胞(PBMC)并进行计数后，在适当的时间点将外周血单个核细胞(PBMC)悬液加入所述细菌感染肺类器官模型中。

9.根据权利要求8的所述的细菌感染肺类器官模型与免疫微环境共存体系的构建方法，其特征在于，所述外周血单个核细胞(PBMC)悬液的浓度为1.5×10^5个/mL。