[发明专利]一种靶向脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法

说明书

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种靶向性敲低脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法。本发明构建方法包括：构建GD3sKO小鼠；制备靶向性敲除小鼠AMPK表达的腺相关病毒AAV2/2Rretro‑AMPKknockdown；将所述腺相关病毒AAV2/2Rretro‑AMPKknockdown注射至所述GD3sKO小鼠中，得到所述小鼠模型。本发明制备得到的小鼠模型可以作为研究GBS疾病相关临床表型以及作用机制的动物模型使用，实验结果表明，AMPK的表达促进了AMAN小鼠神经轴索和髓鞘的再生，进而促进了AMAN小鼠损伤神经的再生。本发明小鼠模型为GBS疾病的诊断和治疗提供新的依据。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种靶向性脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法。

背景技术

吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barré syndrome,GBS)是一种神经科常见的由自身免疫介导的周围神经病，高达30％的患者发病后可迅速进展至呼吸肌麻痹而危及生命，其在世界范围内的发病率为0.6-4/10万。目前治疗GBS的方法主要手段有血浆置换和静脉用免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)，但临床资料表明仅65％的患者对上述方法有效，约20％的患者在治疗1年后仍遗留有严重的残疾，5％的患者因治疗效果差而死亡，给社会、家庭和个人造成极大的负担。根据其病理特征的不同，GBS可分为轴索型和脱髓鞘型两种，其中急性运动轴索型神经病(Acute motor axonal neuropathy,AMAN)是最常见的轴索型GBS。

临床资料表明，AMAN患者往往恢复慢、预后差。其致病性抗神经节苷脂抗体不仅可以直接损伤轴索，还抑制GBS患者损伤后的轴索再生。单磷酸腺苷活化蛋白激酶(Adenosinemonophosphate-activated protein kinase,AMPK)是一个复杂的异源三聚体，由一个α催化亚基和两个β和γ调节亚基组成，能够通过感受细胞能量状态来维持真核细胞的ATP生成和消耗的平衡。

目前，AMPK在以GBS/AMAN为代表的免疫性周围神经病中损伤神经再生中的作用尚无明确的报道。因此，设计动物模型对其临床特征进行分析研究具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种靶向性脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法，得到的小鼠模型可为GBS疾病的诊断和治疗提供新的依据。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种靶向性敲低脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法，包括：

构建GD3s KO小鼠；制备靶向性敲除小鼠脊髓前角运动神经元AMPK表达的腺相关病毒AAV2/2Rretro-AMPK knockdown；将所述腺相关病毒AAV2/2Rretro-AMPKknockdown注射至所述GD3s KO小鼠中，得到所述小鼠模型。

优选的，所述构建GD3s KO小鼠的方法包括：通过同源重组替换GD3s基因的靶基因，插入到载体中，构建重组打靶载体；将所述打靶载体电转至ES细胞中，得到电转ES细胞；将所述电转ES细胞注入小鼠囊胚，再移植至母鼠子宫中，将分娩获得的雄性小鼠与野生型雌性小鼠交配获得嵌合小鼠F0代，F0代杂合子小鼠交配，得到的F1代纯合子小鼠即为所述GD3s KO小鼠。

优选的，所述靶基因序列如SEQ ID NO:1所示。

优选的，所述同源重组步骤包括：从BAC克隆子RP23-18C16和RP23-378B8中套取得到左右同源臂，将所述同源臂和正筛选标记基因Neo通过酶切连接的方式插入至载体中。