[发明专利]一种巨噬细胞膜包被的仿生DNA纳米药物及其制备方法和应用

说明书

本发明属于核酸药物负载、药物递送领域，涉及一种仿生DNA纳米药物，特别是指一种巨噬细胞膜包被的仿生DNA纳米药物及其制备方法和应用。所述仿生DNA纳米药物，包括载药DNA纳米笼、胆固醇修饰的TNF‑α siRNA和巨噬细胞膜，其中载药DNA纳米笼被巨噬细胞膜包被，胆固醇修饰的TNF‑α siRNA插入在巨噬细胞膜的表面。本发明获得的仿生DNA纳米药物利用两种核酸药物联合调控TNF‑α与NF‑κB炎症通路，显著下调炎症巨噬细胞和佐剂诱导的关节炎小鼠中的炎症因子及其转录基因的表达水平，降低临床关节炎指数并改善关节损伤，是一种联合治疗类风湿关节炎的新策略。

技术领域

本发明属于核酸药物负载、药物递送领域，涉及一种仿生DNA纳米药物，特别是指一种巨噬细胞膜包被的仿生DNA纳米药物及其制备方法和应用。

背景技术

类风湿性关节炎（Rheumatoid Arithritis，RA）是一种慢性自体免疫疾病，目前难以治愈。近二十年，一系列抗细胞因子的生物制剂已成功上市和应用，极大地改善了抗RA治疗。与传统的抗RA治疗药物不同，生物制剂多为单克隆抗体，注射后能中和RA病人体内的炎症细胞因子，抑制炎症反应，降低炎症水平。肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）是RA病理进程中最关键的炎症细胞因子之一，抗TNF-α的单克隆抗体亦是最有效的一类生物制剂。然而，抗TNF-α的生物制剂仅对不超过半数的病人有效，这与RA疾病的高度异质性有关，说明在疗效不佳的病人中，TNF-α不是导致RA的最关键因素；这还与单克隆抗体自身的稳定性差、靶向性差有关，难于以有效形式到达炎症关节组织；此外，抗TNF-α的生物制剂注射后，在体内广泛抑制TNF-α，易诱发感染和恶性肿瘤。因此，临床急需基于抗TNF-α的优化治疗策略，增效减毒抗TNF-α疗法。

RA的病理机制较为复杂，包含多种免疫细胞与体细胞的相互作用，并伴随众多炎症通路的紊乱和失调。其中，NF-κB通路是RA发生和发展过程中最重要的炎症通路之一。抑制NF-κB通路能下调多种炎症细胞因子、趋化因子、粘附因子的表达，是一种高效抑制炎症的治疗策略。与上述抗TNF-α疗法联用，有望克服RA的异质性，降低抗TNF-α疗法剂量的同时，提高该疗法的普遍有效性。

核酸类药物与单克隆抗体相比，生产成本更低，免疫原性更弱，是一种替代单克隆抗体的理想药物。例如针对TNF-α的小干扰核糖核酸（small interfering RNA，siRNA）进入细胞后，会与细胞质中的多蛋白复合物结合形成RNA诱导沉默复合体（RNA-inducedsilencing complex，RISC），导致翻译TNF-α的mRNA被RISC内切酶降解，造成TNF-α翻译基因的沉默，下调TNF-α的表达。NF-κB诱饵寡脱氧核糖核苷酸（NF-κB decoy dODNs）进入细胞后能特异性地结合NF-κB的P50/P65复合体，阻断NF-κB进入细胞核，抑制多种炎症细胞因子、趋化因子、粘附因子的表达，降低炎症反应。将靶向TNF-α的siRNA与NF-κB decoy dODNs联用，有望通过抑制NF-κB通路以增效抗TNF-α疗法。但与单克隆抗体类似，TNF-α siRNA和NF-κB decoy dODNs的体内稳定性和靶向性较差、入胞效率较低，使其体内应用和共递送受限。

为了解决NF-κB decoy dODNs和TNF-α siRNA在应用和递送中存在的难以克服的技术问题，本课题组进行了长期的研究摸索。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提出一种巨噬细胞膜包被的仿生DNA纳米药物及其制备方法和应用。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种巨噬细胞膜包被的仿生DNA纳米药物，包括载药DNA纳米笼、胆固醇修饰的TNF-α siRNA和巨噬细胞膜，其中载药DNA纳米笼被巨噬细胞膜包被，胆固醇修饰的TNF-αsiRNA插入在巨噬细胞膜的表面，其中巨噬细胞膜来源于RAW 264.7巨噬细胞。