[发明专利]一种半连续液相合成比伐芦定的合成工艺

说明书

本发明涉及一种半连续液相合成比伐芦定的合成工艺，具体包括如下步骤：a）、用半连续液相法合成片段a：N‑端全保护6肽；用半连续液相法合成片段b：中端全保护6肽；用连续液相法合成片段c：C‑端全保护8肽；b）、将片段a和b缩合后脱保护，得到片段d，即N‑端全保护12肽；c）、将片段d和片段c缩合得到比伐芦定全保护肽；d）脱除所有保护基团得到比伐芦定粗品。本发明比传统的液相合成比伐芦定具有：耗费溶剂更少、放大生产更加安全、不使用贵金属催化剂、操作更简单、工艺周期更短、成本更低、更适合工业化规模生产等优势。

技术领域

本发明属于多肽合成制备技术领域，具体涉及一种半连续液相合成比伐芦定的合成工艺。

背景技术

比伐芦定（bivalirudin）是2000年12月美国食品药物管理局FDA批准上市的直接凝血酶抑制剂之一（商品名Angiomax，由Medicines制药公司出品），它来源于水蛭素衍生物，是一种合成的含20个氨基酸的多肽，是凝血酶直接的、特异的、可逆性抑制剂。其相对分子质量为2180，氨基酸序列为：D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-lle-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu。

比伐芦定氨基端的D-Phe-Pro-Arg-Pro区域是与凝血酶活性点相互作用的位点，它可与游离型或与结合型凝血酶催化位点和底物识别位点发生特异性结合，从而直接抑制凝血酶的活性。因凝血酶可水解本品多肽顺序中Arg3和Pro4之间的肽键，使本品失活，所以比伐芦定对凝血酶的抑制作用是可逆而短暂的。比伐芦定与水蛭素相反，经肾排泄不是其主要的清除途径，它可能是被内源性多肽酶降解，可安全用于肾损害患者，肾功能正常时，比伐芦定的半衰期为25min。

基于比伐芦定的以上特点与生物学活性，用比伐芦定作为防治血栓的药物有诸多优点：（1）专一性强，特异性直接抑制凝血酶活性，且对血栓结合的凝血酶也有抑制作用；（2）半衰期短，且对凝血酶的抑制作用是可逆性的，故而抗凝效果可以被预测，不需要实验室监测；（3）可安全用于肾损害患者。

比伐芦定在药理学上克服了肝素、低分子肝素及水蛭素的缺点，用于抗凝防栓安全有效。诸多临床试验研究表明，它可替代肝素安全、有效地用于冠状动脉血管成形术PCI、不稳定型心绞痛以及急性心肌梗死溶栓辅助治疗，尤其在肝素诱导的血小板减少症Hf的抗栓治疗中有独特的优势，且在外周动脉介入治疗PPI、心肺移植手术及肾功能不全患者防栓抗栓治疗中亦显示出良好的作用。因此，比伐芦定是一种有着很好临床应用前景的药物。

比伐芦定作为一个很有合成难度的多肽药物，其高昂的合成成本限制了大规模生产和市场应用。目前，国内外已有的液相合成法制备比伐芦定的文献和专利报道较少，而且工艺流程极其繁琐，大多数是固相合成工艺，已有的主要研究论文及专利如下：

美国专利US5196404是比伐芦定的化合物专利，最早报导了比伐芦定的制备方法（1990年7月6日申请），以BOC（叔丁氧羰基）保护的氨基酸为原料，采用固相合成，Boc合成法是采用TFA（三氟乙酸）可脱除的Boc（叔丁氧羰基）为α-氨基保护基，侧链保护采用苄醇类。合成时将一个Boc氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用TFA脱除Boc，用三乙胺中和游离的氨基末端，然后通过DIC（N,N-二异丙基碳二亚胺）活化，偶联下一个氨基酸，最终脱保护多采用强刺激、剧毒的氟化氢，在特殊的聚四氟乙烯装置中切肽树脂。此方法不适合规模化合成。在Boc多肽合成法中，为了便于下一步的多肽合成，反复用酸进行脱保护，一些副反应被带入实验中，例如多肽容易从树脂上切除下来，氨基酸侧链在酸性条件不稳定等。

中国专利CN201811101059.4，使用Fmoc-tBu固相合成策略，采用了碱可脱除的Fmoc（9-芴甲氧羰基）为α-氨基的保护基，其优势为在酸性条件下是稳定的，不受TFA等试剂的影响，应用温和的碱处理可脱保护，所以侧链可用易于酸脱除的叔丁氧基、三苯甲基等，树脂采用90%TFA可切除的对烷氧苄醇型树脂或者低浓度就能够切除的CTC树脂。