[发明专利]区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的分子标记及方法

权利要求书

1.区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的分子标记，其特征在于，

所述分子标记包括分子标记1和/或分子标记4，

所述分子标记1包括SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中的2个SNP位点：

第34位的SNP位点C/A和第38位的SNP位点G/T；

SEQ ID NO：1为TCGTACAAGTATTTTAGCAATACTTTCACTGATMGTAKTAAATGCTATTCGAAC；

所述分子标记4包括SEQ ID NO：2所示核苷酸序列中：

第4-6位的INDEL位点TCG/GAT和第127位的SNP位点A/G；

SEQ ID NO：2为ATCKMKCCTCTATTTTCTACTTTTCTTGAAAAAGTGTTTTCTCTCTTTGATTTCTTGTCTATCTTCTTTCATCTTCTCTAGTAGGGAATTCAATTAGTATTCTAATTGAATTGTTAATAGCAGTAARGATTCTG。

2.根据权利要求1所述的区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的分子标记，其特征在于，

所述分子标记1中，

川党参的2个SNP位点分别为A、T；

羊乳的2个SNP位点分别为C、G；

秦岭党参的2个SNP位点分别为A、G；

所述分子标记4中，

川党参的INDEL位点为TCG，SNP位点为A；

羊乳的INDEL位点为GAT，SNP位点为A；

秦岭党参的INDEL位点为TCG，SNP位点为G。

3.基于权利要求1或2所述区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的分子标记的引物，其特征在于，

分子标记1的引物为：

上游引物：5’-GTCATTATCCCTCGAGAAGTAG-3’，SEQ ID NO：3；

下游引物：5’-GCTGACCTGCTAACCTCTATAC-3’，SEQ ID NO：4；

分子标记4的引物为：

上游引物：5’-TAGAAGGTGGGTTGAAAGGAGT-3’，SEQ ID NO：5；

下游引物：5’-AGCCTACTCTCAAAATCGAACC-3’，SEQ ID NO：6。

4.权利要求1或2所述分子标记或权利要求3所述引物在区分川党参、羊乳和秦岭党参物种中的应用。

5.区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述引物。

6.区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取待检测样品，提取DNA；

(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，使用权利要求3所述引物进行PCR扩增；

(3)对步骤(2)扩增产物进行测序。

7.根据权利要求6所述的区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的方法，其特征在于，

步骤(2)中扩增体系为：

2×Taq PCR Master Mix 25μL，每个引物1μM，模板DNA 1μL，加ddH₂O至最终体积为50μL。

8.根据权利要求6所述的区分川党参、羊乳和秦岭党参物种的方法，其特征在于，

步骤(2)中扩增程序为：

94℃变性2min；

94℃30s，退火温度30s，72℃60s，35个循环；

72℃2min。