[发明专利]一种诱导虎耳草愈伤组织次生代谢产物的方法

说明书

本发明公开了一种诱导虎耳草愈伤组织次生代谢产物的方法，该方法是所述方法是取虎耳草叶片清洗，选取佳灭菌组合进行消毒灭菌处理，放入培养基中经愈伤组织诱导生长阶段、愈伤组织增殖阶段和代谢物诱导培养阶段无菌培养。通过添加不同浓度的水杨酸SA、硝普钠SNP提高虎耳草愈伤组织的岩白菜素、没食子酸、原茶儿酸等药用成分的含量，为虎耳草在栽培过程中提高次生代谢产物产量提供新途径。

技术领域

本发明涉及虎耳草栽培领域，特别是一种诱导虎耳草愈伤组织次生代谢产物的方法。

背景技术

虎耳草(SaxifragastoloniferaMeerb.)为虎耳草科(Saxifragaceade)虎耳草属的多年生常绿全草，性微苦，辛，寒，有小毒。具有祛风、清热、凉血解毒等功效。现代药理研究表明，虎耳草提取物具有抗炎、抑菌、杀菌、抗癌、抗氧化等药理活性，具有较好的药用价值，还可作为观赏植物，而且在净化污水方面也有不错的效果。我国主要分布于华东地区江苏、浙江、安徽，华北地区河北，西南贵州、云南等地、西北地区陕西、甘肃的东南部以及华中地区湖北北部等地。而现今虎耳草野生植物资源越来越少，繁殖系数较低，且繁殖时间较长，难以满足制药对药材来源的批量需求以及人们对观赏植物的需求。

虎耳草含有槲皮苷、没食子酸、绿原酸、岩白菜素和原儿茶酸等药用化学成分，根据现代药理研究表明，虎耳草提取物具有抗炎、抑菌、杀菌、抗癌、抗氧化等药理作用。但是，以上药用成分在药用植物中含量较低，如何在保护药用植物资源条件下调控药用有效成分在药用植物中含量，也是一大问题，有待进一步研究。

现今人们的滥采乱挖，虎耳草野生植物资源越来越少，并且虎耳草通常采用分株繁殖以及压条繁殖等方式来繁育，繁殖系数较低，且繁殖时间较长，难以满足制药对药材来源的批量需求以及人们对观赏植物的需求。近些年虎耳草的研究主要集中在虎耳草干旱、土壤类型对虎耳草成分及光合的影响，虎耳草病害的分离鉴定，虎耳草的提取方法、提取物化学成分的测定、鉴定及虎耳草化学药理作用研究等方面。

诱导子(elicitors)是植物抗病生理过程中诱发植物产生植物抗毒素和引起植物过敏反应(hypersensitive)或自身防御反应(self-defensereation)的因子)，包括侵染植物的微生物及植物细胞内的分子。诱导子根据性质可分为生物诱导子和非生物诱导子两类，生物诱导子主要是指微生物类诱导子，是指植物在防御过程中为对抗微生物感染而产生的物质，主要包括分生孢子(conidia)、降解细胞壁的酶类、有机体的细胞壁碎片、有机体产生的代谢物以及培养物滤液中的成分，如真菌的菌丝体、发酵液、真菌分泌物等。目前人们由实验推出的主要第二信使包括Ca2+，cAMP.磷酸肌醇、G一蛋白、水杨酸(Salicylicacid,SA)、茉莉酸盐、茉莉酸(Jasmonates,JAs)、茉莉酸甲酯(methylejasmonate,MeJA)、一氧化氮(NO)、乙烯以及植物细胞壁组成成分等。

水杨酸(Salicylicacid,SA)是一种广泛存在于植物体内的小分子酚类物质，化学名叫邻羟基苯甲酸，化学式为C₆H₄(OH)(COOH)，是桂皮酸的衍生物，在植物的许多生理发挥着重要作用，1828年JohnBuchner首先于柳树皮分离出水杨醇糖苷，在1838年命名为水杨酸，而水杨酸的首次的合成是在1874年。。水杨酸在植物体内有两种存在方式，分别是游离态和结合态，游离态的水杨酸在通常状态下表现为结晶状态，当在157℃～159℃达到熔融状态，能够迅速的从合成部位或被处理的部位运输到远距离的所需组织中。SA是一种能提高植物非生物抗性的信号分子，如抗旱性，抗寒性、抗病性、耐盐性等，不但可以调节植物生长发育过程，还可以对植物种子的萌发、开花、果实成熟等生理生化过程起调控作用。

硝普钠(SNP)为鲜红色透明粉末状结晶，易溶于水，液体呈褐色性质不稳定，放置后或遇光时易分解，使高铁离子(Fe)变为低铁离子(Fe)，液体变为蓝色。由于其作用迅速，而且消失也快，是治疗高血压急症及急性左心衰竭的常用药物。