[发明专利]一种诱导虎耳草愈伤组织次生代谢产物的方法

权利要求书

1.一种诱导虎耳草愈伤组织次生代谢产物的方法，其特征在于：所述方法是取虎耳草叶片清洗，选取灭菌组合进行消毒灭菌处理，放入培养基中经愈伤组织诱导生长阶段、愈伤组织增殖阶段和代谢物诱导培养阶段无菌培养；

所述次生代谢产物为没食子酸、原茶儿酸、岩白菜素、绿原酸、槲皮苷和槲皮素；

所述方法是选取虎耳草叶片在流水下用毛刷轻刷，去除表面灰尘、杂质，用洗涤剂水浸泡外植体后，用蒸馏水清洗，再于超净工作台进行消毒灭菌处理，切掉外植体四周边缘与消毒剂接触的部分，再切成长0.5cm*0.5cm的小片，接种在培养基中培养，在愈伤组织诱导生长阶段，选用MS+2mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA培养基培养，在愈伤组织增殖阶段，选用MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA培养基增殖培养，在代谢物诱导培养阶段，是将诱导子加入MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA培养基中诱导培养；

所述诱导子为SA溶液或/和SNP溶液；

所述SA溶液的配制：称取0.27624g~1.3812g的SA，加95%乙醇溶解后无菌水定容至100mL，用0.22μm的有机滤膜过滤除菌，配制成20μmol/L~100μmol/L 的SA溶液；

所述SNP溶液的配制：称取0.5959g~3.5754g的SNP，用无菌水定容至100mL，用0.22μm的有机滤膜过滤除菌，配成20μmol/L~120μmol/L的SNP溶液；

所述加入SA溶液或SNP溶液的培育时间为5d；

所述灭菌组合为70%酒精40s和0.1%HgCl₂ 10min；

所述MS是由30g蔗糖和6g琼脂加入到1L的MS培养基中制得；所述培养基的pH:5.8~6.0；培养条件：光照：12h/d，光强度为1500~2500lx，温度：23~27℃。

2.根据权利要求1所述的诱导虎耳草愈伤组织次生代谢产物的方法，其特征在于：所述SA溶液的配制：称取0.55284g~0.82872g的SA，加95%乙醇溶解后无菌水定容至100mL，用0.22μm的有机滤膜过滤除菌，配制成40μmol/L~60μmol/L 的SA溶液。

3.根据权利要求1所述的诱导虎耳草愈伤组织次生代谢产物的方法，其特征在于：所述SNP溶液的配制：称取1.1918g~2.3836g的SNP，用无菌水定容至100mL，用0.22μm的有机滤膜过滤除菌，配成40μmol/L~80μmol/L的SNP溶液。