[发明专利]一种重组人促卵泡生成素Fc融合蛋白及制备方法

说明书

本发明公开了一种重组人促卵泡生成素Fc融合蛋白及制备方法。本发明提供了SEQID No.5所示信号肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：A1)制备FSH蛋白或其融合蛋白；A2)提高FSH蛋白或其融合蛋白的表达量或产量；A3)促进FSH蛋白或其融合蛋白分泌到宿主细胞外；本发明采用FSH‑Fc融合蛋白的三种信号肽用于引导FSH‑Fc融合蛋白真核细胞分泌表达，人工改造信号肽SP1分泌表达量显著优于抗体轻链信号肽SP2和荧光素酶信号肽SP3，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种重组人促卵泡生成素Fc融合蛋白及制备方法。

背景技术

促卵泡生成素(FSH)由脑垂体分泌，成分为糖蛋白，分子量约为42kDa，由α链和β链通过非共价结合，因早期发现其对女性卵泡成熟的促进作用而得名。后来研究发现FSH在男女两性体内都是很重要的激素之一，调控发育、生长、青春期性成熟以及生殖相关的一系列生理过程。FSH在女性中的功能是促进卵泡发育和成熟，及协同促黄体生成素(LH)促使发育成熟的卵泡分泌雌激素和排卵，参与正常月经的形成；在男性中的功能是促进睾丸曲细精管的成熟和精子的生成。因此，FSH可以单独使用或与LH联合应用治疗不育不孕症。

FSH可以从脑垂体或尿液中分离提取或采用基因重组技术制备。重组FSH制品纯度高，安全性好、质量可控、与提取产品相比活性相当，备受市场青睐。临床上，FSH需连续8-10天皮下注射给药刺激女性卵泡发育，给患者带来诸多不便和痛苦。因此，开发长效重组FSH类产品是未来的一个趋势。

发明内容

本发明一个目的是提供FSH融合蛋白。

本发明提供的FSH融合蛋白，为如下B1)或B2)：

B1)所述FSH融合蛋白，其A链为FSH的α链，B链为连接标签的FSH的β链；

B2)所述FSH融合蛋白，其A链为连接SP1信号肽的FSH的α链，B链为连接SP1信号肽和标签的FSH的β链；

所述SP1信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。

上述标签可以为Fc、HSA、CTP或XTEN中任一或者任2种组合，优选标签为Fc标签。

优选地，B1)所示的FSH融合蛋白为FSH-Fc融合蛋白，FSH为人FSH，具体的讲，将Fc标签融合于人FSH分子的β链的碳末端，形成FSH-Fc的B链，B链通过Fc结构的二硫键形成同二聚体；FSH分子的α链(即FSH-Fc的A链)通过非共价键与B链结合，形成二价FSH分子。

优选地，B2)所示的FSH融合蛋白为SP1-FSH-Fc融合蛋白，FSH为人FSH，具体的讲，将Fc标签融合于人FSH分子的β链的碳末端，且将SP1信号肽连接在人FSH分子的β链的氮末端，形成SP1-FSH-Fc的B链，B链通过Fc结构的二硫键形成同二聚体；将SP1信号肽连接在人FSH分子的α链的氮末端，形成SP1-FSH-Fc的A链，SP1-FSH-Fc的A链通过非共价键与B链结合，形成二价FSH分子。

进一步优选地，上述的FSH-Fc融合蛋白，上述Fc来自于IgG1-Fc，上述FSH为人FSH。Fc为IgG1-Fc，具体的讲，采用人IgG1-Fc的CH2和CH3区；且去除碳末端的Lys(K)氨基酸，减少分子的电荷异质性。

上述FSH融合蛋白由FSH的α链和连接Fc标签的FSH的β链非共价结合而成；

上述FSH融合蛋白由连接SP1信号肽的FSH的α链和连接SP1信号肽和Fc标签的FSH的β链非共价结合而成。

所述Fc标签在FSH的α链的C端；

所述SP1信号肽连接在FSH的α链或β链的N端。