[发明专利]检测试剂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及检测试剂及其制备方法和应用。本发明提供了检测试剂，包括：生物素化‑艾蒿过敏原提取物；上述生物素化‑艾蒿过敏原提取物包括：艾蒿过敏原提取物和生物素；上述艾蒿过敏原提取物包括：艾蒿提取物和艾蒿植物防御素样蛋白。本发明的检测试剂通过在艾蒿提取物中添加天然艾蒿过敏蛋白植物防御素样蛋白，并按照特定摩尔比进行生物素化标记，配制生物素化‑艾蒿过敏原提取物溶液，可以提高检测的灵敏度及特异性。同时，该检测试剂适配于全自动磁微粒化学发光仪，反应用时短，操作简捷，自动化程度高。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及检测试剂及其制备方法和应用。

背景技术

过敏反应，属于Ⅰ型变态反应，又叫速发型变态反应，是机体受到同一抗原再刺激后引起的组织损伤或生理功能紊乱的特异性免疫应答。花粉是季节性过敏的主要诱因之一，属于吸入性过敏原，花粉过敏常常难以避免，又被称为枯草热和花粉症，可诱发鼻炎、皮炎、哮喘等过敏反应，严重者可发生休克，影响患者的生活质量。

艾蒿花粉是夏末和秋季花粉过敏主要诱因，在中国，由艾蒿引起的过敏率为11.3％，在中国北部特殊地区过敏率高达50％；且艾蒿花粉过敏患者除了具有典型季节性鼻炎和/或哮喘症状之外，部分患者进食蔬菜、水果后会发生食物过敏。

艾蒿提取物为不同类蛋白的混合物，包含植物防御素样蛋白、致病相关蛋白1、nsLTP1、Profilin、Pocalcin和果胶酸裂。不同致敏蛋白的丰度不同，植物防御素样蛋白和nsLTP1为艾蒿主要致敏蛋白，其中植物防御素样蛋白致敏率可达95％。目前，过敏性疾病的诊断方法主要有体内试验和体外试验。体内诊断有激发试验(鼻/支气管/口腔/粘膜激发)、皮肤点刺试验(SPT)和特异性斑贴试验(APT)。其中激发试验是公认的诊断过敏的金标准，但是操作繁琐，使患者痛苦，也存在一定的危险性。体外试验主要是基于血清学的IgE检测。特异性IgE测定是过敏原检测的手段，是机体过敏程度的客观测定指标。因此，对艾蒿花粉过敏患者进行特异性IgE定量检测可以评估疾病风险；对疾病进行早期诊断，提前规避风险；为脱敏治疗过程提供用药指导。

目前，艾蒿过敏原特异性IgE定量检测试剂盒在国内有4个注册文号，包括：(1)进口的艾蒿w6过敏原特异性IgE检测试剂(荧光免疫法)，该试剂盒的含过敏原组分为抗原包被帽；(2)国内的艾蒿过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒(酶联免疫捕获法)，该试剂盒的含过敏原组分为艾蒿过敏原-生物素溶于0.05M三羟甲基氨基甲烷缓冲液中；(3)国内的艾蒿花粉过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒(酶免疫分析法)，该试剂盒的含过敏原组分为生物素化的艾蒿花粉过敏原；(4)国内的艾蒿W006过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒(荧光磁微粒化学发光免疫法)，该试剂盒的含过敏原组分为生物素化的艾蒿蛋白提取物。以上试剂盒所用含过敏原试剂组分均为常规艾蒿提取物，其组分植物防御样蛋白致敏率为95％，该组分的缺失或量不足可能会导致漏检风险。因此，研究一种漏检率低的艾蒿过敏原特异性IgE定量检测试剂盒至关重要。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了检测试剂及其制备方法和应用。本发明的检测试剂通过在艾蒿提取物中添加天然艾蒿过敏蛋白植物防御素样蛋白，并按照特定摩尔比进行生物素化标记，配制生物素化-艾蒿过敏原提取物溶液，可以提高检测的灵敏度及特异性。同时本发明的检测试剂适配于全自动磁微粒化学发光仪，反应用时短，操作简捷，自动化程度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了检测试剂，包括：生物素化-艾蒿过敏原提取物；

上述生物素化-艾蒿过敏原提取物包括：艾蒿过敏原提取物和生物素；

上述艾蒿过敏原提取物包括：艾蒿提取物和艾蒿植物防御素样蛋白。

在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂还包括：链霉亲和素包被的磁微粒、抗人IgE酶标抗体、校准品、生物素化-抗人IgE抗体和缓冲液。