[发明专利]一种盐酸哌甲酯中遗传毒性杂质的检测方法

说明书

本发明属于GC‑MS法检测药品杂质领域，具体涉及一种盐酸哌甲酯中遗传毒性杂质的检测方法。该方法采用GC‑MS法同时检测遗传毒性杂质硫酸二甲酯、氯化苄、硫酸二乙酯与对甲苯磺酰氯；所述GC‑MS法采用Agilent DB‑35MS UI毛细管柱，采用如下程序升温模式使4种所述遗传毒性杂质分离：初始柱温为40℃，保持1分钟，以每分钟5℃的速率升温至120℃，保持1分钟，再以每分钟10℃的速率升温至230℃，保持2分钟，最后以每分钟60℃的速率升温至250℃，保持5分钟。本发明采用GC‑MS法配合特定毛细管柱和程序升温模式，使4种杂质完全分离，进而实现定量检测。

技术领域

本发明属于GC-MS法检测药品杂质领域，具体涉及一种盐酸哌甲酯中遗传毒性杂质的检测方法。

背景技术

盐酸哌甲酯(Dexmethylphenidate hydrochloride)是一种中枢神经兴奋药，主要用于治疗注意缺陷多动障碍，还用于巴比妥类药物引起的嗜睡、倦怠、呼吸抑制及各种抑郁症。其作用原理为通过阻断突触前神经元对去甲肾上腺素和多巴胺的再摄取，促进这些单胺类物质释放到神经元外空间而发挥作用。盐酸哌甲酯为外消旋体，其右旋异构体比左旋异构体更容易进入中枢神经系统，药理活性更好。

从1997年的甲磺酸奈非那韦中遗传毒性杂质甲磺酸乙酯导致患者DNA序列异常，到近几年的缬沙坦、雷尼替丁、二甲双胍由于存在遗传毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)而被全球大量召回事件，遗传毒性杂质的控制已成为当今杂质控制的热点和趋势。欧洲药品管理局(EMA)发布的《遗传毒性杂质限度指南》、美国食品药品监督管理局(FDA)发布的《原料药和成品药中遗传毒性和致癌性杂质》、ICH M7的《评估和控制药物中DNA反应杂质以限制潜在致癌风险》及中国药典2020年版的“遗传毒性杂质控制指导原则”均对遗传毒性杂质的控制做了详细的说明，明确了遗传毒性杂质控制的重要性。

基于以上遗传毒性杂质事件和各国法规的陆续颁布，国内外药企也开始重视对其产品进行危害性评估，确定是否存在形成相关遗传毒性杂质的可能性。盐酸哌甲酯合成工艺见图1。其中起始物料苯甲酰甲酸酯是由苯甲酰甲酸与甲醇反应得到，反应中使用的催化剂浓硫酸与甲醇可产生硫酸二甲酯。硫酸二甲酯为无色或微黄色、略有葱头气味的挥发性剧毒液体，对黏膜有强烈的腐蚀性，吸入后可引肺水肿甚至起呼吸窘迫，具较强的有致突变性和致癌性，国际癌症中心将其列为2A类致癌物质。硫酸二乙酯为乙基化试剂，同样具有高毒性、致突变和致癌作用。欧盟在2012年就将硫酸二甲酯和硫酸二乙酯共同列入高度关注物质清单中。

起始物料对甲苯磺酰肼的合成使用了对甲苯磺酰氯，其为具有警示结构的遗传毒性杂质。合成工艺中使用的相转移催化剂苄基三乙基氯化铵由氯化苄和三乙胺缩合制得，氯化苄为易挥发的刺激性液体，含有遗传毒性杂质的警示结构，同样具有致突变和致癌性。因此对盐酸哌甲酯中硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、氯化苄及对甲苯磺酰氯的控制非常重要。

目前，未见测定盐酸哌甲酯中遗传毒性杂质的报道，也未见采用一个方法同时测定硫酸二甲酯、氯化苄、硫酸二乙酯及对甲苯磺酰氯的报道。硫酸二甲酯与硫酸二乙酯的检测方法主要为气相色谱法(GC)、气相色质谱联用法(GC-MS)和液相色谱法(HPLC)。采用GC法时灵敏度难以达到测定的要求；硫酸二甲酯和硫酸二乙酯均无紫外吸收基团，采用HPLC法时需衍生化才能测定，费时费力，还容易引入衍生化试剂干扰目标物测定。此外硫酸二甲酯稳定性较差，遇高温会降解，遇水易水解成甲醇和硫酸，因此对配制的溶剂要求较高，必须使用纯度极高的有机溶剂。氯化苄常用测定法为GC法，未见GC-MS法测定氯化苄的报道。对甲苯磺酰氯常用测定方法为GC和HPLC法，两种方法的灵敏度均比较低，无法达到检测的要求。也有采用HPLC-MS法测定，但由于对甲苯磺酰氯具有很高的反应活性，直接测定误差较大，需进行衍生化后测定，操作繁琐。

发明内容

本发明的目的是提供一种盐酸哌甲酯中遗传毒性杂质的检测方法，方法操作简便、灵敏度高、准确性好，可将该类药物中的遗传毒性杂质有效检出。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：