[发明专利]一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法，属于生物制品技术领域。合成高危型(HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82)，低危型(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44、HPV81、HPV83)25种分型HPV全基因组后，连入pcDNA3.1(+)骨架载体系统，将HPV全基因组分别整合到人卵巢癌细胞系ovcar3基因组中，获得25株稳定整合HPV全基因组的人卵巢癌细胞系。可制备基因组DNA、细胞沉淀、细胞悬液等各类模拟临床样品的新型质控品或试剂盒，适用于多种检测平台。为25种HPV分型全长基因组稳定整合的人源细胞系质控品，能更准确的测定病毒载量，质控HPV检测全流程。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体地说，涉及一种用于人乳头瘤病毒分子检测的质控品及其制备方法。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)属于乳头瘤病毒科，是一种无被膜包被的环状双链DNA病毒，由DNA核心和蛋白衣壳组成，衣壳由主要衣壳蛋白(L1)和次要衣壳蛋白(L2)组成。基因组全长约8000碱基对(bp)，分为3个功能区，即早期转录区(E区，编码e1、e2、e4、e5、e6、e7等早期蛋白，参与病毒的复制、转录、翻译调控和转化等功能)、晚期转录区(L区，编码衣壳蛋白L1和L2)和非转录区(长控制区，LCR，含有dna的复制起点和表达所需的调控元件，调控病毒的转录与复制)。已报道HPV超过200种，可通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类。根据HPV感染后危害性，将其分为高危型(HPV16、HPV18、HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82)，低危型(HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44、HPV81、HPV83)以及其他亚型。流行病学研究显示，高危型HPV在人体正常宫颈上皮细胞中持续感染是宫颈癌、直肠癌发生的主要诱因之一，低危型与寻常疣、扁平疣、跖疣等相关。

HPV早期检测尤其是精确分型对宫颈癌的早期发现、预防、预警和治疗极为关键。临床检测HPV主要是基于病毒核酸检测，具体方法有PCR-反向点杂交法、PCR-荧光探针法、PC R-导流杂交法杂交捕获-化学发光法等。检测试剂种类较多，具有不同的原理和特点，分析灵敏性、特异性等性能指标也各有差异。为了提高实验室及不同试剂盒检测结果的可靠性及一致性，应当开展实验室间的室间质量评价，对实验室HPV检测或者基因分型的结果进行比对，监控不同平台及实验室检测能力，提高结果报告准确性。

校准品(物)、质控品(物)是实现体外诊断临床检测及监督检验结果准确一致的主要工具，也是保证量值传递的实物计量标准。HPV国际标准物质为利用人宫颈细胞系提取的HPV阴性的基因组DNA稀释重组HPV基因组质粒而成。同时，目前市面上HPV质控品也均为质粒来源，部分用质粒加入人源基因组稀释得来。此类标准品不能监控样品处理流程，同时与临床样品存在较大的基质差异，形式单一。其次，在临床检测中，HPV病毒载量是评价宫颈病变程度重要参考指标，更近一步反应真实病毒感染程度。(HPV病毒载量即：单位感染上皮细胞中HPV的拷贝数)。研究表明，HPV的不同基因分型和病毒载量是CIN2+和CI N3+的重要预测因子。根据HPV基因型和病毒载量来识别具有较高CIN2+和CIN3+风险的患者，这对于制定个体化的分诊及随访策略很重要。而以质粒形式制备的质控品并不具备检测病毒载量的能力。

发明内容

1、要解决的问题

针对以上标准品/质控品在实际使用场景下的局限性，本发明提出一种新型质控品，为25种HPV分型全长基因组稳定整合的人源细胞系质控品，能更准确的测定病毒载量，质控HPV检测全流程；同时HPV分型制备的质控品及试剂盒，能够制备成gDNA、细胞沉淀、细胞悬液等多种形式，适用于多种检测平台。