[发明专利]一种可降解羽毛的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种可降解羽毛的基因工程菌，其特征在于，所述工程菌是对Bacillus sp. JY-23菌株上的角蛋白酶基因Y1_15990进行克隆和异源表达，利用基因工程技术构建的重组菌；所述角蛋白酶基因Y1_15990基因序列如SEQ ID NO.1所示；

Bacillus sp. JY-23菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO：M20211638。

2.一种如权利要求1所述的可降解羽毛的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：以Bacillus sp. JY-23菌株中角蛋白酶基因Y1_15990的PCR扩增，得到Y1_15990扩增产物；

步骤二：将Y1_15990扩增产物和载体pET-22b(+)用限制性内切酶Quick Cut NcoI和Quick Cut SalI双酶切，双酶切后，利用T4连接酶将目的基因Y1_15990连接到用同样经限制性内切酶酶切过的pET-22b(+) 表达质粒上，获得重组表达载体pET-22b(+)-Y1_15990；

步骤三：将重组表达载体pET-22b(+)-Y1_15990转化至E. coli DH5α感受态细胞，经含氨苄青霉素的LB培养基筛选，挑取单克隆进行菌落PCR扩增验证，筛选出阳性克隆菌；

步骤四：从阳性克隆菌中筛选出Y1_15990角蛋白酶基因测序正确的阳性克隆菌；

步骤五：从基因序列正确的阳性克隆菌中抽提pET-22b(+)-Y1_15990质粒转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞中，构建出重组工程菌E. coli BL21(DE3)/pET-22b(+)-Y1_15990。

3.根据权利要求2所述的一种可降解羽毛的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述步骤一，Bacillus sp. JY-23菌株从家禽养殖场中筛选得到，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO：M 20211638。

4.根据权利要求2所述的一种可降解羽毛的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述步骤一中，PCR扩增用到的引物及引物序列如下所示：

F: 5'-GGGGCCATGGACATGAAGAATAAAAG-3'；

R: 5'-AGTAGGCCATATGATATGTACAAGAAATC-3'，

其中F、R分别表示上、下游引物，下划线为酶切位点。

5.一种如权利要求1所述的基因工程菌在降解羽毛上的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，以羽毛为唯一的碳氮源制成培养基，向所述的培养基加入基因工程菌，进行降解。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，将基因工程菌E. coli BL21(DE3)/pET-22b(+)-Y1_15990单菌落于LB液体培养基中，进行培养，获得种子液；将种子液按2-6%（V/V）接种量接种于以羽毛为唯一碳氮源的羽毛降解培养基。